一、精浆睾酮水平放射免疫分析方法（论文文献综述）
吕凡,蔡秋莹,李育林,汤晓月,任冬霞,李云[1]（2021）在《用体外器官培养方法研究EDCs对新生小鼠睾丸的影响》文中进行了进一步梳理目的通过已建立的小鼠睾丸体外培养系统,研究四种内分泌干扰物（Endocrine Disrupting Chemicals, EDCs）对男性内分泌系统的影响。方法将新生小鼠的睾丸组织在体外环境中培养24 h,而后在培养基中分别加入浓度为0.1μM, 1μM, 10μM and 100μM的四种（DEHP、MEHP、NP、p, p’-DDE）内分泌干扰物并培养72 h,同时设置对照组;培养结束后进行组织学观察,测定冻存培养基中睾酮和抑制素βB （INH-βB）的分泌水平,同时测定细胞色素P450侧链裂解酶（P450Scc）、3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）、细胞色素P45017α-羟化酶（P450C17）和波形蛋白（vimentin）的基因表达情况。结果所有剂量组中睾酮的分泌水平均发生改变;P450Scc、3β-HSD、P450C17和INH-βB蛋白质的表达及mRNA水平均受到四种内分泌干扰物的影响（P<0.05）;DEHP和MEHP降低了波形蛋白的mRNA水平（P<0.05）,而NP和p, p’-DDE对波形蛋白没有显着影响（P>0.05）。结论本研究建立的体外培养新生小鼠睾丸模型中,所选的四种已知EDCs改变了两种睾丸激素水平,三种类固醇合成酶以及与支持细胞功能相关的波形蛋白的表达。
张自强,孙永康,刘建涛,杨万期[2]（2021）在《归肾丸加味治疗男性不育症肾阴亏虚证的疗效观察》文中研究表明目的探讨归肾丸加味治疗男性不育症肾阴亏虚证的临床疗效以及对血清促卵泡生成素（FSH）、促黄体生成激素（LH）、泌乳素（PRL）和精浆中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平的影响。方法该研究筛选男性不育症患者96例作为研究对象,按随机数字表法分为对照组和观察组,各48例。对照组患者接受辅酶Q10胶囊,10 mg/次,口服,3次/d。观察组在对照组治疗基础上给予归肾丸加味治疗,1剂/d, 2次/d。两组连续治疗3个月。比较两组患者的精液质量、肾阴亏虚证症状评分、临床疗效、血清FSH、LH、PRL以及精浆中SOD和MDA水平。结果与对照组比较,治疗后观察组患者的精子计数、精子活力、正常形态精子率、精子活率明显高于对照组,精液液化时间和肾阴亏虚证症状评分明显低于对照组（P<0.01）;观察组的总有效率显着多于对照组（P<0.05）;与对照组比较,治疗后观察组患者的血清FSH、LH、PRL明显高于对照组（P<0.01）;与对照组比较,治疗后观察组精浆中SOD水平明显高于对照组,MDA水平明显低于对照组（P<0.01）。结论归肾丸加味治疗男性不育症肾阴亏虚证的临床疗效明显,改善生殖激素水平及氧化应激可能与其作用有关。
管斯琪[3]（2020）在《补肾生精法治疗少弱精子症及其调控生精细胞增殖与凋亡的研究》文中认为目的人类生育力逐年降低已经成为影响发展的医学和社会学问题,男性因素导致的不孕不育占了 40%-50%,其中少弱精子症是男性不育症最常见的病因之一。对于特发性精液异常,西药治疗效果欠佳,手术治疗的应用范围存在一定局限性,而中医药具有较好的疗效。菟枸助育汤是在五子衍宗丸的基础上加减化裁而来,临床用于治疗少弱精子症逾20年,但目前尚无相关的研究。故本研究设计临床试验,观察评价菟枸助育汤对男性不育少弱精子症患者的临床疗效,并设计动物实验探究菟枸助育汤的核心药对“菟丝子-枸杞子”对生精功能障碍模型大鼠生精功能的影响,并对其具体的作用机制进行探讨。方法临床研究:收集男性不育少弱精子症76例,采用无病例对照研究的方法,观察菟枸助育汤对少精子症和弱精子症受试者精液质量（包括精液液化状态、精液量、精子活动率、精子浓度和总数等指标）和中医证候评分的干预作用。入组时,采集所有受试者的一般信息、病史、合并用药、体格检查等相关资料。研究第1天起每日给予入组的受试者菟枸助育汤中药免煎颗粒治疗,疗程共90天,分别于第0、30、60、90天各进行一次访视,记录受试者的精液常规结果和中医证候评分,同时进行安全性观察,记录各类不良事件,填写病例报告表,每次访视时严格进行脱落、剔除的评估,最后统计所有数据。实验研究:1.将78只SD大鼠随机分为空白对照组（NC组）、模型对照组（GTW组）、左卡尼汀组（GTW+LEV组）、菟丝子-枸杞子药对组（GTW+SCFL组）和药对+抑制剂组（LY+SCFL组）。2.除NC组以外,其余各组用雷公藤多苷（40mg/kg）灌胃4周,建立生精功能障碍模型。3.第5周起GTW+LEV组（予10ml/kg左卡尼汀灌胃）、GTW+SCFL组（予菟丝子-枸杞子中药液灌胃）和LY+SCFL组（予菟丝子-枸杞子中药液灌胃）每日分别予以相应药物干预,LY+SCFL组于第1周起每周1次尾静脉注射PI3K抑制剂。4.实验8周后测定各组大鼠精子质量、附睾/睾丸脏器系数,检测性激素、抑制素B、附睾肉毒碱的水平,光镜下和透射电镜下观察睾丸的组织病理形态和细胞的超微结构,用免疫组化法、western blot以及Real-Time PCR技术检测大鼠睾丸组织SCF、c-kit、PI3K、p-Akt、Bad、Bcl-2 和 Bax 蛋白及 mRNA 的表达。结果临床研究:本研究共完成临床病例76例,纳入研究的男性不育少精子症和弱精子症患者经过菟枸助育汤治疗后,总体的精液质量中液化状态、PR精子百分比、PR+NP精子百分比、精子浓度和精子总数等疗效性指标显着改善,具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;中医证候评分随着治疗进行有了明显的下降（P<0.05或P<0.01）;疗效判定为“痊愈”的11例,“显效”29例,“有效”32例,“无效”4例,总有效率为94.74%。整个观察期间脱落病例4例,无剔除病例,未见任何不良反应报告。实验研究:经菟丝子-枸杞子干预后的GTW+SCFL组与GTW组相比,大鼠的一般状态、附睾脏器系数、精子质量、卵泡生成素（FSH）、黄体生成素（LH）、泌乳素（PRL）和附睾肉毒碱均有显着的改善,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;睾丸组织病理形态及细胞的超微结构观察发现,GTW+SCFL组与GTW组比较,生精小管结构、排列较正常,生精细胞明显增多,形态改善,内含的线粒体等细胞器增多;免疫组化、western blot和Real-Time PCR结果显示,与GTW组比较,GTW+SCFL组大鼠睾丸SCF、c-kit、PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白含量升高,Bax、Bad蛋白表达下降（P<0.05或P<0.01）;LY+SCFL组与GTW+SCFL组相比,SCF、c-kit和PI3K的表达无明显差异,p-Akt和Bcl-2表达减少,Bad和Bax的蛋白表达增加（p<0.05或P<0.01）。结论1.菟枸助育汤在改善男性不育少弱精子症患者的精液参数和肾虚证候中医评分方面疗效显着,能提高患者的生精功能。2.菟枸助育汤中的核心药对“菟丝子-枸杞子”可以改善生精功能障碍模型大鼠一般状态、附睾脏器系数、精子质量、FSH、LH、PRL和附睾肉毒碱,并对雷公藤多苷致睾丸组织和生精细胞的形态结构和功能的损伤具有较好的修复作用。3.“菟丝子-枸杞子”药对可以有效调控模型大鼠睾丸组织SCF、c-kit、PI3K、p-Akt、BAD、Bcl-2、Bax 蛋白及其 mRNA 的表达,通过调控 SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2 信号通路促进生精细胞增殖和抑制生精细胞凋亡的作用。综上,菟枸助育汤可有效提高男性不育少弱精子症患者的生精功能,临床疗效显着,其作用机制可能是通过SCF/c-kit--PI3K--Bcl-2通路调控生精细胞增殖和凋亡来实现的。
杨旭[4]（2020）在《T-2毒素对小鼠睾丸的炎性损伤作用及ROS/NLRP3炎性小体活化的调控机制》文中研究指明T-2毒素可损伤雄性生殖功能,降低雄性小鼠生育力,但机制尚不明确。睾丸炎性损伤是导致雄性生殖功能障碍的核心机制,ROS介导的NLRP3炎性小体活化在炎性反应中发挥关键调节作用,但T-2毒素是否通过ROS介导的NLRP3炎性小体活化,诱导睾丸炎性损伤,导致雄性生殖功能障碍尚不清楚。本研究以睾丸炎性损伤、ROS和NLRP3炎性小体活化三者之间的关系为理论基础,以“T-2毒素导致睾丸炎性损伤并受ROS/NLRP3炎性小体活化的调控”为理论假说和研究切入点,拟展开以下三个方面研究。（1）首先选取80只雄性昆明小鼠,随机等分成四组,分别灌胃给与0（对照组,CG）、0.5（低剂量组,LG）、1（中剂量组,MG）和2 mg/kg B.W.（高剂量组,HG）的T-2毒素,试验周期为28 d,建立亚急性T-2毒素中毒小鼠模型。通过检测雄性小鼠生育力、睾丸结构（显微结构、超微结构、细胞凋亡和血睾屏障）和睾丸功能（精子发生和睾酮合成）、睾丸炎性反应、睾丸中ROS含量和NLRP3炎性小体关键因子的表达,探究T-2毒素对睾丸损伤、睾丸炎性反应和ROS/NLRP3炎性小体活化的影响;（2）而后以TM4细胞（小鼠支持细胞系）为受试对象,测定T-2毒素对TM4细胞的半数抑制浓度(IC50),依此确定后续细胞毒性实验中T-2毒素的适宜剂量;分别以终浓度为0、2(1/4 IC50)、4(1/2 IC50)或6 nM(3/4 IC50)的T-2毒素处理TM4细胞,建立T-2毒素中毒细胞模型,检测TM4细胞的活性和凋亡率、细胞功能标志性因子（Ocln、ZO-1、Cx-43和N-cad）的表达、炎性反应、ROS含量和NLRP3炎性小体关键因子的表达,分析确定T-2毒素与TM4细胞炎性损伤和ROS/NLRP3炎性小体活化的剂量-效应关系,并筛选出后续干预实验的T-2毒素剂量;（3）最后依据TM4细胞活性试验,分别筛选出ROS清除剂（NAC）和NLRP3炎性小体活化抑制剂（MCC950）的适宜干预剂量;使用5 mM的NAC和20 nM的MCC950分别联合T-2毒素（4 nM）干预TM4细胞,验证ROS/NLRP3炎性小体活化在T-2毒素致TM4细胞炎性损伤中的作用。综合分析体内、外试验结果,筛选出T-2毒素致雄性生殖障碍的靶点。实验结果如下:（1）T-2毒素处理雄性小鼠试验结果:1)雄性小鼠生育力:各毒素处理组小鼠体重显着低于CG（P<0.05;P<0.01）;与CG相比,HG小鼠的交配指数和繁育指数显着降低（P<0.05）;与MG和HG小鼠交配的雌鼠胚胎着床数、活胎数极显着低于CG（P<0.01）,而发生胎儿溶解的雌鼠数量显着增加（P<0.05;P<0.01）,表明T-2毒素中毒抑制小鼠生长,破坏雄性小鼠生育力。2)睾丸结构:HG小鼠睾丸重量和体积极显着低于CG（P<0.01）;T-2毒素处理小鼠睾丸的显微结构和超微结构均受损;TUNEL染色显示,T-2毒素暴露导致睾丸组织中生精细胞、间质细胞和支持细胞均发生细胞凋亡;MG和HG睾丸组织中血睾屏障相关蛋白（Ocln、Cx-43、N-Cad和ZO-1）的基因和蛋白表达显着低于CG（P<0.05;P<0.01）,表明T-2毒素破坏血睾屏障损伤,引起睾丸结构损伤。3)睾丸功能:MG和HG睾丸每日精子生成量和附睾尾精子密度显着低于CG（P<0.05,P<0.01）,精子畸形率显着高于CG（P<0.05,P<0.01）,精子超微结构破坏,表明T-2毒素导致精子发生障碍;各毒素处理组血清中睾酮含量显着低于CG（P<0.05;P<0.01）,MG和HG睾丸中睾酮合成酶（St AR、P450scc、P450c17、3β-HSD和17β-HSD）的表达显着低于CG（P<0.05,P<0.01）,表明T-2毒素导致小鼠睾酮合成障碍。4)睾丸炎性反应:各毒素处理组血清中IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α含量显着高于CG,IL-10含量显着低于CG（P<0.05;P<0.01）;各毒素处理组睾丸中IL-6和TNF-α的含量和m RNA表达显着高于CG,IL-10的含量和m RNA表达显着低于CG（P<0.05;P<0.01）,表明T-2毒素导致睾丸炎性反应。5)NLRP3炎性小体活化:MG和HG睾丸中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18基因和蛋白表达及IL-1β、IL-18含量显着高于CG（P<0.05;P<0.01）,表明T-2毒素活化睾丸中NLRP3炎性小体。6)ROS蓄积:MG和HG小鼠睾丸组织中ROS和MDA含量极显着高于CG（P<0.01）,而CAT和SOD活性极显着低于CG（P<0.01）,表明T-2毒素导致睾丸中ROS蓄积和氧化应激。（2）T-2毒素处理TM4细胞试验结果如下:1)T-2毒素对TM4细胞的IC50为8.10 nM。2)4 nM和6 nM组TM4细胞活性、细胞标志性因子（Ocln、ZO-1、Cx-43和N-cad）表达显着低于0 nM组（P<0.05;P<0.01）,表明T-2毒素破坏TM4细胞功能。3)T-2毒素处理组TM4细胞的凋亡率极显着高于0 nM组（P<0.01）,表明T-2毒素诱导TM4细胞凋亡。4)4 nM和6 nM组TM4细胞培养上清中IL-6和TNF-α含量显着高于0 nM组,IL-10含量极显着低于0 nM组（P<0.05;P<0.01）,表明T-2毒素诱导TM4细胞发生炎性反应。5)4 nM和6 nM组TM4细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达,培养上清中IL-1β和IL-18含量均显着高于0 nM组（P<0.05;P<0.01）,表明T-2毒素活化TM4细胞中NLRP3炎性小体。6)各毒素处理组TM4细胞中ROS和MDA含量显着高于0 nM组,SOD和CAT活性显着低于0 nM组（P<0.05;P<0.01）,表明T-2毒素导致TM4细胞ROS蓄积和氧化应激。（3）NAC和MCC950分别联合T-2毒素处理TM4细胞试验结果:1)5 mM NAC或20 nM MCC950可显着缓解T-2毒素导致的TM4细胞活性降低、细胞标志性因子（Ocln、ZO-1、Cx-43和N-cad）m RNA表达的抑制和细胞凋亡（P<0.05;P<0.01）。2)5 mM NAC或20 nM MCC950可显着缓解T-2毒素导致的培养上清中IL-6和TNF-α含量升高、IL-10含量降低（P<0.05;P<0.01）,表明干预ROS或NLRP3炎性小体活化可缓解T-2毒素导致TM4细胞炎性反应。3)5 mM NAC或20 nM MCC950可显着缓解T-2毒素导致的TM4细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达升高、培养上清中IL-1β和IL-18含量升高（P<0.05;P<0.01）,表明干预ROS或NLRP3炎性小体活化均可缓解T-2毒素导致的NLRP3炎性小体活化。4)5 mM NAC可显着缓解T-2毒素导致的ROS蓄积,但20 nM MCC950不能缓解ROS蓄积,表明ROS介导了NLRP3炎性小体活化。综上所述,T-2毒素可导致睾丸和TM4炎性损伤,并受ROS介导的NLRP3炎性小体活化的调节;睾丸炎性损伤表现为睾丸结构（显微结构、超微结构、血睾屏障损伤及细胞凋亡）损伤及功能（精子发生和睾酮合成）障碍;TM4炎性损伤表现为细胞活性下降、细胞凋亡和功能标志性因子表达降低。
杨凯[5]（2020）在《曾庆琪教授辨治男性不育症的学术思想及润精汤治疗少弱精子症的临床和实验研究》文中研究指明目的本文首先对曾庆琪教授治疗男性不育症的学术思想和临证经验进行分析总结;在前期理论的基础上采用单盲、随机、阳性对照药物的临床研究方法初步探讨润精汤对特发性少弱精子症患者的临床有效性和安全性;然后在运用奥硝唑诱导建立的少弱精子症SD雄性大鼠模型的基础上,通过观察润精汤对少弱精子症模型大鼠精液质量、性激素水平、大鼠睾丸组织病理形态变化、睾丸组织细胞凋亡、睾丸波形蛋白表达和ERK信号通路表达的变化,初步探讨润精汤治疗少弱精子症的作用靶点和作用机制,为润精汤治疗特发性少弱精子症的临床应用提供科学依据。方法1.经验总结:对曾庆琪教授治疗男性不育症的学术思想和临证经验进行分析总结,从病因病机、辨病论治、诊断治法、方药配伍、优生助孕和预防调护等方面进行了详细论述。2.临床研究:采用单盲、随机、阳性对照药物的临床研究方法,将符合诊断标准和纳入标准的72例特发性少弱精子症患者随机分为试验组（润精汤）和对照组（还少胶囊）,每组36例,分别治疗3个月,记录两组患者治疗前后的精液质量（精液量、精子浓度、精子总数、精子前向运动百分率、精子总活动力）、性激素水平、中医症状评分、安全性指标和不良反应情况,评价润精汤的临床有效性和安全性。3.实验研究:将32只SD雄性大鼠采用单纯随机抽样方法分成四组,每组8只,分别为空白组、模型组、低剂量组和高剂量组。空白组予以生理盐水灌胃;模型组予以奥硝唑ORN（400mg/kg·d）灌胃;低剂量组予以润精汤（14g/kg）+奥硝唑ORN（400mg/kg·d）灌胃;高剂量组予以润精汤（56g/kg）+奥硝唑ORN（400mg/kg·d）灌胃,疗程四周。实验结束后,检测大鼠血清性激素指标（FSH、LH和T）、大鼠精液质量（精子浓度、精子前向运动百分率、精子总活动力和精子畸形率）,采用Western Blot和免疫组织化学法测定大鼠睾丸波形蛋白表达和睾丸ERK信号通路表达,采用TUNEL法检测大鼠睾丸组织细胞凋亡情况。结果1.临床研究:①试验组（润精汤）和对照组（还少胶囊）均能提高精液质量（精液量、精子浓度、精子总数、精子前向运动百分率、精子总活动力）、调节性激素水平和改善中医临床症状,从而提高患者配偶妊娠率和临床有效率,且试验组（润精汤）改善更为明显。②润精汤未见明显毒副作用及不良反应。2.实验研究:①精液质量:模型组大鼠精子浓度、精子总活动力、精子前向运动百分率低于空白组（P<0.05）,精子畸形率高于空白组（P<0.05）;低剂量组、高剂量组的精子总活动力高于模型组（P<0.05）,精子畸形率低于模型组（P<0.05）;低剂量组的浓度和精子前向运动百分率轻度高于模型组（P>0.05）;高剂量组的浓度和精子前向运动百分率高于模型组（P<0.05）。②性激素:各组黄体生成素（LH）无明显变化（P>0.05）;模型组卵泡刺激素（FSH）高于空白组（P<0.05）,低剂量组和高剂量组低于模型组（P<0.05）;模型组睾酮（T）低于空白组（P<0.05）,低剂量组和高剂量组高于模型组（P<0.05）。③睾丸组织病理形态变化:空白组大鼠睾丸组织中各曲细精管生精上皮形态规则、排列整齐和结构完整,生精小管管腔内可见各级分裂活跃、形态规则、排列整齐和结构完整的生精细胞和大量形态正常且成熟的精子。模型组大鼠睾丸组织中各曲细精管生精上皮形态紊乱、排列不整齐和结构松散,生精小管管腔内各级生精细胞排列紊乱,且大量减少,甚至脱落,精子和生精细胞数量明显减少,且形态明显异常,生精上皮部分变性可见大量空泡。低剂量组大鼠睾丸组织中各曲细精管生精上皮形态的规则性、排列的整齐性和结构的完整性较模型组有所改善,生精小管管腔内正常生精细胞数和形态正常且成熟的精子数较模型组也有所增加,脱落生精细胞数量有所减少。高剂量组大鼠睾丸组织病理形态结构较低剂量组进一步有所改善,接近于空白组。④睾丸组织细胞凋亡的变化:模型组生精小管管腔内可见大量生殖细胞凋亡,大鼠睾丸组织凋亡阳性细胞率明显高于空白组（P<0.01）。低剂量组和高剂量组生精小管管腔内可少量生殖细胞凋亡,低剂量组大鼠睾丸组织凋亡阳性细胞率明显低于模型组（P<0.05）,高剂量组大鼠睾丸组织凋亡阳性细胞率明显低于模型组（P<0.01）。⑤睾丸组织波形蛋白表达的变化:空白组睾丸组织波形蛋白主要分布于睾丸支持细胞的核周围,并且从基底区域向近腔小室延伸。模型组睾丸组织波形蛋白信号和分布范围与空白组比较明显减弱,波形蛋白表达量明显降低（P<0.001）。低剂量组和高剂量组的睾丸组织波形蛋白的主要分布从睾丸支持细胞的核周围区域向内腔延伸,并且波形蛋白在两组间分布也趋于正常,波形蛋白表达量明显高于模型组（P<0.01）。⑥睾丸组织ERK信号通路的变化:模型组大鼠睾丸组织p-ERK蛋白表达量明显高于空白组（P<0.001）;低剂量组和高剂量组大鼠的睾丸组织p-ERK蛋白表达量明显低于模型组（P<0.001）。结论1.润精汤是曾庆琪教授基于“精室理论”,根据精室的功能特点,总结出“通补并用”为核心的治疗法则,创制而成的治疗少弱精子症的经验方,药物组成有菟丝子、黄精、山药、枸杞、仙灵脾、水蛭、刺五加、红景天、陈皮、川牛膝,诸药具有“肝脾肾三脏兼顾、气血阴阳平调、补而不腻、通而不损”的特点,全方以补肾健脾为主,兼有补血养肝、活血通络、行气利湿的作用,本方治法较单补肾填精法或补肾活血法更为全面,更加符合当今大多数男性不育症的临床实际情况,尤其是对江南地区的患者更为适宜。2.润精汤和还少胶囊均能提高精液质量（精液量、精子浓度、精子总数、精子前向运动百分率、精子总活动力）、调节性激素水平和改善中医临床症状,从而提高患者配偶妊娠率和临床有效率,且润精汤改善更为明显。所以说润精汤是安全和有效的,且未见明显不良反应,有一定的临床推广价值。3.润精汤可以改善奥硝唑诱导的少弱精子症大鼠的精液质量、血清性激素和睾丸组织病理形态学变化,初步猜测可能与润精汤调控下丘脑-垂体-睾丸性腺轴,调节生殖内分泌激素的水平,改善睾丸微循环和精子生成的局部微环境有关;此外润精汤可上调睾丸波形蛋白的表达和下降p-ERK的表达,提高生殖细胞结构的稳定性和抑制大鼠生殖细胞的凋亡,促进生殖细胞增殖等,其作用机理可能与抗氧化应激有关。
姜会真[6]（2019）在《“秩边透水道”针法对少弱精症大鼠精液质量的影响》文中认为目的:探究“秩边透水道”针法对少弱精症大鼠的精液治疗的影响,并分析其刺激时间,选择最佳刺激方法,为临床治疗少弱精症提供实验依据。方法:将60只成年雄性SD大鼠按随机随机数字表分为六组,每组10只,分别是空白组（A组）、模型组（B组）、普通针刺（双侧肾俞）组（C组）、“秩边透水道”（双侧）组（D组）、“秩边透水道”（双侧隔日）组（E组）、电针“秩边透水道”（双侧隔日）组（F组）,除空白组予以同等体积的生理盐水灌胃以外,通过将B组、C组、D组、E组、F组给予腺嘌呤灌胃,按腺嘌呤20mg/100g体重给药,连续灌胃28天,造模成功后次日开始进行针刺干预,除空白组、模型组外,只抓取束缚外,C组、D组、E组、F组,连续针刺干预28天后;摘取肾、睾丸、附睾脏器,比较脏器系数;在显微镜下观察精子密度、精子活动率,制备大鼠睾丸切片,显微镜下观察组织结构变化;取大鼠腹主动脉血,分离血清,检测大鼠性激素水平变化（T、FSH、LH、GnRH）。结果:1.一般状况观察,大鼠的毛发炸起,蜷缩状态,活动量减少,饮水量增加,大鼠体重初始变化不大,从前四周体重变化不明显,第35天空白组与其余5组,体重有差异,差别具有显着统计学意义（P<0.01）。2.通过各组脏器重量比较发现,空白组的肾脏重量与其余5组之间的重量之间有差异（P<0.01）;空白组的睾丸、附睾、肾上腺的重量要高于其余5组的重量;各组脏器系数比较后发现,空白组的肾脏、睾丸、附睾的脏器系数水平要高于其余5组的脏器系数,差别具有显着统计学意义（P<0.01）。3.各组之间的精液数量之间的比较,空白组的精子密度水平显着高于其他组别的精子密度水平;模型组的精子浓度水平显着低于其他4组的精子密度水平,具有差异,差别具有显着统计学意义（P<0.05）;C组与F组比较发现,F组的精子密度水平高于C组;E组与F组比较发现后发现有显着差异,差别具有显着统计学意义（P<0.01）;精子活力的改善,空白组的精子活力与其余5组比较发现,差别具有显着统计学意义（P<0.01）;B组的精子活力与其余4组比较发现,其精子活力水平低于剩余4组,差别具有显着统计学意义（P<0.01）,C组与其余3组之间的精子活力有差别,差别具有显着统计学意义（P<0.05）;D组与F组比较发现,其精子活力水平有差异,F组的精子活力水平高于D组;E组与F组的精子活力水平比较发现,E组的精子活力显着低于F组,差别具有显着统计学意义（P<0.01）。4.在不同组别之间的性激素水平的比较,空白组的睾酮水平最高,与其余5组比较具有差异性,差别具有显着统计学意义（P<0.01）,B组与剩余4组比较发现,其睾酮水平最低;空白组的促黄体生成素水平与其余5组比较发现具有差异,差别具有显着统计学意义（P<0.01）,模型组与其余4组的促黄体生成素的水平有显着差异,差别具有显着统计学意义（P<0.01）;空白组的促性腺激素与其余5组比较具有差异,差别具有显着统计学意义（P<0.01）;各组促卵泡刺激素水平发现的比较,各组之间比较未发现差异。5.各组大鼠的睾丸切片变化,空白组的睾丸切片与其余5组内的睾丸切片比较,其余5组生精功能受损。结论:1.“秩边透水道”针法对大鼠少弱精症的治疗效果优于普通针刺组,能够改善精液质量。2.“秩边透水道”针法对大鼠的下丘脑-垂体-睾丸轴的调节作用,以调节睾酮为主。3.电针“秩边透水道”（双侧隔日）组针刺干预效果优于隔日“秩边透水道”组,电针“秩边透水道”（双侧隔日）组综合刺激效果对大鼠少弱精症精液质量影响最明显。
贾艳飞[7]（2017）在《高脂饮食诱导性肥胖对雄性SD大鼠下丘脑—垂体—睾丸性腺轴影响及机制的研究》文中指出一、生物信息学方法研究高脂饮食诱导性肥胖对雄性SD大鼠新陈代谢的影响目的:应用生物信息学方法探寻高脂饮食诱导性肥胖雄性SD大鼠生理代谢改变,及肥胖对下丘脑-垂体-睾丸性腺轴可能造成的影响和途径。方法:利用NCBI中的GEO基因芯片公共数据库进行芯片数据搜索,搜索关键词为大鼠（rat）,肥胖（obesity）,脂肪组织（adipose tissue）,最终选择芯片数据（GSE8700）作为分析对象。使用bioconductor包中R工具的函数及Limma程序包识别差异性表达基因（Differentlyexpressedgenes,DEGs）,应用DAVID数据库对差异表达基因进行GO富集分析和KEGG通路分析,选用String在线数据库构建差异表达基因的PPI网络。结果:通过对GSE8700进行分析,得到1014个表达差异基因,其中上调基因544个,下调基因470个。上调差异基因GO条目全部富集于生物过程（BP）,主要为氧化还原、轴突生成、对肽类激素反应、对糖皮质激素反应过程。下调差异基因GO富集于生物过程（BP）,主要为女性怀孕、对有机物质的反应、蛋白质水解、对类固醇激素的反应、甘油三醋代谢等过程;富集于细胞组成（CC）,主要为细胞外间质,细胞质,血液微球等组成;富集于分子功能（MF）,主要为丝氨酸肽链内切酶活性、脂肪酸结合、磷脂质结合等功能。上调差异基因并未富集到任何KEGG通路,而下调差异基因富集到3条通路,分别为PPAR信号通路（过氧化物酶体增殖物激活型受体）、脂肪的消化和吸收通路、胰腺分泌通路。重要的节点基因为热休克蛋白90ABl（Hsp90ab1）,细胞外钙敏感受体（Casr）,趋化因子9（Cc19）,受体相互作用蛋白激酶4（Ripk4）,二甲基甘氨酸脱氢酶（Dmgdh）,脂肪酸结合蛋白l（Fabpl）,景天庚酮糖激酶（Shpk）,载脂蛋白H（Apoh）,胆囊收缩素受体（Cckar）,谷氨酸代谢受体3（Grm3）等。结论:高脂饮食诱导性肥胖状态下,机体营养物质的新陈代谢发生了改变,尤其是脂质代谢发生了紊乱,这是肥胖的重要特点之一。GO和KEGG结果提示肥胖状态下机体生殖功能可能受到影响,类固醇激素、肽类激素代谢异常可能是其影响途径。二、高脂饮食诱导性肥胖对雄性SD大鼠的神经-生殖内分泌代谢及生精功能的影响目的:研究肥胖对机体神经-生殖内分泌代谢和生精功能的影响,并探讨上述影响产生的机制。方法:6周龄SPF级雄性SD大鼠45只,随机分为普通对照组15只、高脂饮食组30只,分别给予普通饲料、高脂饲料喂养16周,最后得到对照组大鼠15只、肥胖组大鼠22只。麻醉后处死,测定大鼠体重、身长、内脏脂肪、双侧肾脏、双侧睾丸的重量,并计算Lee指数、脂肪系数、肾脏系数、睾丸系数。腹主动脉取血,使用放射免疫法测定:Leptin、GLU、LH、FSH、T、E2,使用酶联免疫法测定:GnRH、GnIH、SHBG、TC、TG,并根据相关公式计算 GnRH/GnIH、E2/T、cFT、FTI。将大鼠左侧睾丸固定制作石蜡切片,HE染色观察生精小管组织学改变并记Johnsen评分,Tunel法测定睾丸组织生精细胞凋亡率。将大鼠右侧睾丸于冰上匀浆,测定睾丸组织的SOD活力及MDA含量。制作附睾尾部精子悬液,使用汉密尔顿计数仪测定精子数、活力、前向运动精子百分比。结果:在22周末,高脂饮食肥胖组大鼠（N=22）较对照组大鼠（N=15）体重明显升高[（552.93±7.76）gvs（622.91±7.26）g],差异有统计学意义（P<0.01）。与对照组比较,肥胖组大鼠Lee指数、脂肪系数、血清Leptin、INS、TG明显增高（P<0.05）,而肾脏系数、睾丸系数明显降低（P<0.05）。与对照组比较,肥胖组大鼠GnRH、GnRH/GnIH比值、LH、TT、SHBG、FTI、cFT明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）,E2、E2/T比值明显升高（P<0.05）。与对照组比较,肥胖组大鼠睾丸组织HE染色显示睾丸生精小管未见明显萎缩,但生精小管常见“空泡样”改变,且生精细胞排列偶见紊乱、层次减少,其睾丸组织Jhosen评分较对照组未见明显降低（P>0.05）。与对照组相比,肥胖组大鼠睾丸生精细胞TUNEL法显示凋亡增加,凋亡指数计数[（3.09±0.28）vs（4.26±0.35）%]降低,差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较,肥胖组大鼠睾丸组织匀浆液SOD活力[（62.57±4.64）vs（47.20±3.05）U/mgprot]降低,MDA 浓度[（2.94±0.443）vs（4.18±0.38）nmol/mgprot]升高,差异有统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,肥胖组大鼠附睾精子数目[（30.07±2.72）×106/ml vs（24.64±1.53）×106/ml],差异无统计学意义（P>0.05）;精子活力[（36.40±9.17）%vs（14.36±7.67）%],差异有明显统计学意义（P<0.05）;前向运动精子百分比明显下降[（12.80±3.05）%vs（5.27±3.14）%],差异有明显统计学意义（P<0.05）。结论:高脂饮食诱导的肥胖大鼠出现了体重增加、脂肪堆积、瘦素抵抗、胰岛素抵抗、脂质代谢紊乱等代谢改变。高脂饮食诱导性肥胖SD雄性大鼠下丘脑-垂体-睾丸轴代谢活动发挥了抑制作用,表现为血清GnRH、LH、T、cFT、SHBG明显降低,而E2明显升高。高脂饮食诱导的肥胖可能对睾丸组织以功能性损害为主,短时间内对生精小管组织形态的器质性改变较小,但长期来看可能会对其生精小管组织形态结构上造成损害。高脂饮食诱导的营养性肥胖大鼠睾丸组织生精细胞凋亡指数增加,并氧化应激水平提高,最终导致精子活力下降。三、高脂饮食诱导性肥胖导致雄性SD大鼠的下丘脑Kisspeptin-GnRH系统代谢下调目的:研究肥胖对下丘脑生殖调控中枢的影响及可能调控机制。方法:通过高脂饮食诱导建立肥胖大鼠模型,将对照组（N=18）和肥胖组（N=18）大鼠麻醉后,进行下丘脑取材。采用免疫组化染色法测定下丘脑中LepR、Kisspeptin、KisslR、GnRH 和 GnIH 的定位和表达变化;Westem-Blot 法检测 LepR、Kisspeptin、Kiss1R、GnRH、GnIH 的蛋白表达变化;Real-timePCR 法检测 LepR、Kiss1、Kiss1R、GnRH、GnIH的mRNA表达变化。结果:免疫组化结果显示,对照组和肥胖组大鼠的下丘脑LepR阳性着色见于细胞核的棕黄色着色,而Kisspeptin、Kiss1R、GnRH和GnIH其阳性信号均见于细胞质的棕黄色着色。相比较对照组,肥胖组大鼠其下丘脑弓状核LepR、Kisspeptin和GnRH表达显着减少,但两组Kiss1R和GnIH表达均无显着变化。Westem-Blot结果显示,较对照相比,LepR、Kisspeptin、KisslR、GnRH、GnIH在下丘脑均有阳性条带表达。灰度值分析结果显示,肥胖组大鼠LepR、Kisspeptin、GnRH蛋白表达明显下降,较对照组差异有统计学意义（P<0.05）,而Kiss1R、GnIH表达未见明显差异（P>0.05）。qRT-PCR的结果显示,肥胖组大鼠LepR、Kisspeptin、GnRH的mRNA表达明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）,而Kiss1R、GnIH的mRNA表达末见明显差异（P>0.05）。结论:高脂饮食诱导的肥胖导致大鼠下丘脑LepR明显降低、瘦素抵抗,最终导致Kisspeptin-GnRH分泌下调。肥胖对下丘脑-垂体-睾丸性腺轴产生的负性调节作用主要以Kisspeptin促进作用下调导致GnRH分泌减少为主实现,而并非以下丘脑生殖调控中枢的GnIH抑制作用上调实现。
阿卜杜热伊木江·如则[8]（2016）在《异常黏液质型阳痿神经内分泌改变的临床基础及实验研究》文中研究说明目的:（1）研究维医异常黏液质型阳痿患者“性腺轴、肾上腺轴和甲状腺轴”激素的改变,探讨异常黏液质型阳痿发生发展的神经内分泌机制。（2）研究异常黏液质型阳痿病证大鼠模型甲状腺轴功能与形态学改变,探讨甲状腺轴改变在异常黏液质型阳痿病证发生发展中的作用,以及对证维药伊木萨克片对甲状腺轴功能可能的调节作用。方法:（1）临床上选取阳痿患者112例,经维医分型分为异常黏液质型阳痿组（A组）和非异常黏液质型阳痿组（B组）,健康对照者28例（N组）,采集临床病理资料,并检测性腺轴、肾上腺轴及甲状腺轴激素。（2）取80只性功能正常雄性SD大鼠,随机抽取10只设为正常对照组（N组）,其余70只建立异常黏液质证候模型。模型成立后,经APO实验与交配实验筛选出阳痿病证大鼠并随机分为病证模型组（A1组）和病证药物干预组（A3组）;未成阳痿的证候模型再随机分为证候模型组（B1组）和证候药物干预组（B3组）,以伊木萨克片干预两周后检测大鼠甲状腺轴激素并对其下丘脑-垂体-甲状腺轴行形态学研究。结果:（1）临床病理资料分析结果:A组IIEF-5和MSF-4评分均显着低于N（P<0.05）。A组BMI、腰围、收缩压及舒张压均显着高于N组（P<0.05）。A组体重、腰围,BMI均显着高于B组（P<0.05）;脉搏则显着低于B组（P<0.05）。（2）临床性腺轴激素结果:与N组相比,A组T水平显着降低（P<0.05）,E2、PRL、LH、FSH水平则显着升高（P<0.05）。（3）临床肾上腺轴激素结果:血浆COR水平在A组中较N组显着升高（P<0.05）。（4）临床甲状腺轴激素变化:FT3水平在A组中较B组显着降低（P<0.05）。（5）模型大鼠甲状腺轴激素结果:B1组FT4和TT4水平较N组均显着降低（P<0.05）;A1组FT3、FT4、TT3和TT4水平均较N组均显着降低（P<0.05）。经药物干预后,B3组FT3和FT4水平较B1组显着升高（P<0.05）。TT3和TT4水平较B1组有提升,但差异无统计学意义（P>0.05）。A3组FT3、FT4、TT3和TT4水平较A1有提升,但差异无统计学意义（P>0.05）。（6）模型大鼠甲状腺轴形态学结果:下丘脑,正常组组织结构与细胞形态完好。B1和A1组光镜下可见基质疏松;超微结构可见,线粒体基质密度下降,粗面内质网扩张。经药物干预后,B3和A3组有均一定修复。垂体,正常组组织结构与细胞形态完好。B1和A1组光镜下可见基质疏松,轻度水肿;超微结构可见内质网明显扩张,线粒体普遍空泡样变。经药物干预后,B3和A3组有均一定修复。甲状腺,正常组组织结构与细胞形态完好。B1和A1组光镜下可见可见滤泡上皮间质细胞水肿;超微结构显示甲状腺滤泡上皮细胞呈立方形,内质网扩张。经药物干预后,B3和A3组有均一定修复。结论:（1）体质指数和腰围与异常黏液质型阳痿病证的发生发展密切相关,可在临床中作为其分型病理的理参数之一。（2）维医异常黏液质型阳痿病证的发生中“性腺轴、肾上腺轴及甲状腺轴”功能改变导致的神经内分泌紊乱可能发挥着关键性作用。（3）维医异常黏液质型阳痿病证模型大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的病理性变化可能是该病证甲状腺轴神经内分泌功能改变的组织病理学基础。（4）对证维药伊木萨克片对异常黏液质型阳痿病证的治疗作用可能与其对甲状腺轴相关激素的调节与组织病理学改变的修复作用有关。
高菊兴,张纪云[9]（2011）在《人精浆中端粒酶活性测定及其临床意义》文中认为目的观察精浆端粒酶活性（TA）在不同类型男性不育症患者中的变化,以及与精浆睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）浓度之间及精液中精子数量和质量之间的相互关系。方法随机选取110例男性不育症患者与30例生育者,应用酶联免疫吸附（ELISA）方法,对其精浆TA进行检测;应用放射免疫分析（RIA）方法对其精浆T、FSH、LH浓度进行检测;按WHO规定的方法,定量分析精液中的精子密度、精子活率、a+b级精子活力百分率、精液中白细胞数量。结果不育症组精浆TA和T浓度均明显低于生育组（P均<0.01）;不育症组精浆FSH和LH浓度均明显高于生育组（P均<0.05）。在不育症组中,随着精液中精子数量的递减,TA水平亦呈现逐渐下降趋势;精浆中TA与T浓度之间存在明显的相关性（r=0.236,P<0.01）,与FSH和LH浓度之间无相关性（P>0.05）;精子活力、活率正常组精浆TA均高于不良组（P<0.01）;WBC精液组精浆TA高于非WBC精液组（P<0.05）。结论精浆TA水平与精子数量和质量存在一定的相关性,同时与精子发育密切相关的睾酮浓度有协同促进作用,端粒酶在人类生殖发育中发挥着重要作用。检测精浆TA水平对于进一步了解、预防和治疗某些病理状态下所致的生殖能力低下有重要意义。
高健[10]（2010）在《精液细胞学分析在诊断无精子症中的应用研究》文中提出精子发生是一个复杂的过程,受多种因素调节,其发生过程大致分睾丸中生成,附睾中成熟,经由输精管、射精管排出体外。精子发生是受各种因素调节,细胞逐步分化的过程,任何一步异常都会导致无精子症。约有10%-15%已婚夫妇不育,其中男性生育功能障碍约占总不育原因的50%。无精子症是男性不育中最严重的一种,发病率约为5%-20%。无精子症有多种原因,诊断有多种方法。用精液生精细胞学检查方法来鉴别诊断梗阻性与非梗阻性（原发性）无精子症的研究备受关注,但尚未引起足够的重视。本文研究无精子症在男性不育患者中的发生率,进一步从不同方面探讨精液生精细胞在诊断梗阻性和非梗阻性无精子症中的意义。本文通过对来自吉林省生殖医学研究所临床基地的2246例不育患者进行研究,检出无精子症患者242例,通过瑞-姬染色分析精液生精细胞,睾丸细针穿刺吸液细胞学分析,测定睾丸体积、精液pH值、精浆果糖、中性α-糖苷酶活性,放射免疫分析法测定血清FSH、LH、PRL、E2、T水平,常规外周血淋巴细胞染色体标本制备,核型分析,AZF基因检测等,结果如下:无精子症在男性不育患者中发生率为10.77%。在242例无精子症患者精液细胞学分析中,发现有生精细胞存在的患者60例,占无精子症患者24.79%;无生精细胞患者182例,占总无精子症患者的75.21%。在未查到生精细胞的182例患者中,精液细胞学联合多种方法诊断85例为梗阻性无精子症。进一步睾丸细针穿刺细胞学分析发现,83例患者有精子,确诊为梗阻性无精子症。精液细胞学联合多种方法诊断与睾丸细针穿刺细胞学分析的符合率为97.65%（83/85）。与睾丸细针穿刺比较,精液细胞学分析查到生精细胞者60例中,60例均可见曲精小管有未成熟的各级生精细胞或支持细胞,但未发现精子,确诊为非梗阻性无精子症,精液生精细胞检查与睾丸穿刺细胞学分析的符合率为100%（60/60）。精液细胞学分析与睾丸细针穿刺细胞学分析结果经卡方检验,对同一患者精液细胞学检查与睾丸细针穿刺细胞学一致性分析中,生精细胞发育程度一致（P<0.01）。有生精细胞组睾丸体积显着低于对照组（P<0.01）;无生精细胞组睾丸体积、精液量、精液pH值均显着低于对照组与有生精细胞组（P<0.05）。无生精细胞组精浆果糖含量与中性α-糖苷酶活性均显着低于对照组与有生精细胞组（P<0.05）。有生精细胞组FSH、LH显着高于对照组（P<0.01,P<0.05）;而有生精细胞组T显着低于对照组（P<0.05）;无生精细胞组血清FSH、LH均显着高于对照组,两组比较有显着性差异（P<0.05）,而无生精细胞组T显着低于对照组（P<0.05）;无生精细胞组FSH显着低于有生精细胞组（P<0.05）。在无精子症中,克氏症患者检出率为19.01%（46/242）。在46例克氏症患者中,检出精原细胞33例（71.74%）,初级精母细胞20例（43.48%）,次级精母细胞11例（23.91%）,精子细胞3例（6.52%）。AZF缺失检出率占7.85%（19/242）。在AZFb缺失组,精液细胞学分析发现初级精母细胞。在AZFc缺失组,精液细胞学分析有部分患者可检测出各级生精细胞,而有部分未见各级生精细胞。在AZFd缺失组,未见各级生精细胞。以上结果表明:精液生精细胞在无精子症病因诊断中,是非常有价值的非创伤性指标,对区分梗阻性无精子症和非梗阻性无精子症,及梗阻性无精子症的定位诊断有很高的预示性价值,可以替代睾丸活检,甚至可替代睾丸细针穿刺。精液生精细胞与睾丸体积、精液量、精液pH值、精浆果糖含量、中性α-糖苷酶活性、血清FSH、LH、T在诊断无精子症上具有一致性,且相互补充,可联合应用诊断无精子症类型。克氏症患者精液中有不同程度的生精细胞,精液生精细胞检查能一定程度上反应克氏症患者的精子生成能力,可作为临床评估生精功能的方法之一。AZFb、AZFc、AZFd缺失患者精液中有不同程度的生精细胞,精液生精细胞检查能一定程度上反应AZF缺失患者的精子生成能力,可作为临床评估生精功能的方法之一。
二、精浆睾酮水平放射免疫分析方法（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、精浆睾酮水平放射免疫分析方法（论文提纲范文）
（1）用体外器官培养方法研究EDCs对新生小鼠睾丸的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 器官培养与EDCs暴露 |
| 1.3.2 实验分组及剂量设置 |
| 1.3.3 组织染色和免疫组化染色测定激素相关蛋白的表达水平 |
| 1.3.4 放射免疫分析法测定培养基中睾酮的分泌水平 |
| 1.3.5 ELISA法测抑制素βB的分泌水平 |
| 1.3.6 RNA提取和q-PCR检测相关蛋白mRNA水平 |
| 1.4 统计分析 |
| 2 结 果 |
| 2.1 组织学变化结果 |
| 2.2 EDCs对睾酮分泌水平的影响 |
| 2.3 EDCs对INH-βB分泌水平的影响 |
| 2.4 EDCs对激素相关蛋白表达水平的影响 |
| 2.5 EDCs对相关蛋白基因水平的影响 |
| 3 讨 论 |
（2）归肾丸加味治疗男性不育症肾阴亏虚证的疗效观察（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 病例选择 |
| 1.2 临床资料 |
| 1.3 治疗方法 |
| 1.4 观察指标 |
| 1.5 临床疗效标准 |
| 1.6 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组精液质量比较 |
| 2.2 两组肾阴亏虚证症状评分比较 |
| 2.3 两组临床疗效比较 |
| 2.4 两组生殖激素比较 |
| 2.5 两组精浆中SOD和MDA水平比较 |
| 3 讨论 |
（3）补肾生精法治疗少弱精子症及其调控生精细胞增殖与凋亡的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中医药诊治男性不育少弱精子症的研究进展 |
| 1 少弱精子症诱因 |
| 2 中医病名 |
| 3 中医病因病机 |
| 4 中医药治疗 |
| 5 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 生精细胞增殖、凋亡相关蛋白及通路的研究进展 |
| 1 精子发生的三个阶段 |
| 2 生精细胞的增殖 |
| 3 生精细胞的凋亡 |
| 4 生精细胞增殖、凋亡相关蛋白 |
| 5 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 菟枸助育汤治疗男性不育少弱精子症的临床研究 |
| 前言 |
| 1 研究对象 |
| 2 研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 菟丝子-枸杞子对生精功能障碍SD大鼠生精功能的影响 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 基于SCF/c-kit--PI3K--Bcl-2通路探讨菟丝子-枸杞子调控生精细胞增殖与凋亡的作用机制 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（4）T-2毒素对小鼠睾丸的炎性损伤作用及ROS/NLRP3炎性小体活化的调控机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 T-2毒素概述 |
| 1.2 T-2毒素的限量标准 |
| 1.3 T-2毒素的污染现状 |
| 1.4 T-2毒素的危害 |
| 1.5 T-2毒素的雄性生殖毒性 |
| 1.6 T-2毒素的睾丸毒性作用 |
| 1.6.1 T-2毒素对睾丸结构的影响 |
| 1.6.2 T-2毒素对血睾屏障的影响 |
| 1.6.3 T-2毒素对睾丸功能的影响 |
| 1.7 睾丸炎性损伤 |
| 1.7.1 睾丸炎性损伤与睾丸结构 |
| 1.7.2 睾丸炎性损伤与精子生成 |
| 1.7.3 睾丸炎性损伤与睾酮合成 |
| 1.8 NLRP3炎性小体活化与睾丸炎性损伤 |
| 1.9 ROS与NLRP3炎性小体活化 |
| 1.10 研究的目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验动物与TM4细胞系 |
| 2.2 主要仪器与设备 |
| 2.3 主要材料与试剂 |
| 2.4 主要试剂的配置 |
| 2.5 动物试验总体设计 |
| 2.5.1 动物试验技术路线图 |
| 2.5.2 试验动物分组与处理 |
| 2.5.3 小鼠临床症状观察 |
| 2.5.4 雄性小鼠生育力检测 |
| 2.5.5 睾丸组织的形态学观测 |
| 2.5.6 睾丸组织细胞凋亡观测 |
| 2.5.7 血睾屏障相关蛋白检测 |
| 2.5.8 精子发生检测 |
| 2.5.9 睾酮合成检测 |
| 2.5.10 睾丸炎性反应检测 |
| 2.5.11 睾丸组织氧化与抗氧化状态检测 |
| 2.5.12 睾丸组织NLRP3炎性小体检测 |
| 2.6 细胞试验总体设计 |
| 2.6.1 TM4细胞试验技术路线图 |
| 2.6.2 TM4细胞的培养 |
| 2.6.3 T-2毒素对TM4细胞半数抑制浓度的测定 |
| 2.6.4 NAC干预剂量的筛选 |
| 2.6.5 MCC950干预剂量的筛选 |
| 2.6.6 TM4细胞的分组和处理 |
| 2.6.7 TM4细胞活性的检测 |
| 2.6.8 TM4细胞中ZO-1、Ocln、N-cad和Cx-43表达的检测 |
| 2.6.9 TM4细胞凋亡率的检测 |
| 2.6.10 TM4细胞炎性反应检测 |
| 2.6.11 TM4细胞中氧化与抗氧化状态的检测 |
| 2.6.12 TM4 细胞NLRP3炎性小体的检测 |
| 2.7 数据分析及统计 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 小鼠试验结果 |
| 3.1.1 T-2毒素对小鼠精神状态的影响 |
| 3.1.2 T-2毒素对小鼠体重和饮食量的影响 |
| 3.1.3 T-2毒素对雄性小鼠生育力的影响 |
| 3.1.4 T-2毒素对睾丸重量和体积的影响 |
| 3.1.5 T-2毒素对睾丸显微结构的影响 |
| 3.1.6 T-2毒素对睾丸超微结构的影响 |
| 3.1.7 T-2毒素对睾丸组织细胞凋亡的影响 |
| 3.1.8 T-2毒素对血睾屏障的影响 |
| 3.1.9 T-2毒素对精子发生的影响 |
| 3.1.10 T-2毒素对睾酮合成的影响 |
| 3.1.11 T-2毒素对睾丸炎性反应的影响 |
| 3.1.12 T-2毒素对睾丸中ROS和氧化应激的影响 |
| 3.1.13 T-2毒素对睾丸中NLRP3炎性小体的影响 |
| 3.2 TM4细胞T-2毒素中毒的试验结果 |
| 3.2.1 T-2毒素对TM4细胞的IC50 |
| 3.2.2 T-2毒素对TM4细胞活性的影响 |
| 3.2.3 T-2毒素对TM4细胞功能的影响 |
| 3.2.4 T-2毒素对TM4细胞凋亡的影响 |
| 3.2.5 T-2毒素对TM4细胞炎性反应的影响 |
| 3.2.6 T-2毒素对TM4细胞中ROS和氧化应激的影响 |
| 3.2.7 T-2毒素对TM4细胞NLRP3炎性小体活化的影响 |
| 3.3 MCC950对T-2毒素暴露TM4 细胞毒性的影响 |
| 3.3.1 MCC950干预剂量的确定 |
| 3.3.2 MCC950对T-2毒素暴露TM4细胞活性的影响 |
| 3.3.3 MCC950对T-2毒素暴露TM4细胞功能的影响 |
| 3.3.4 MCC950对T-2毒素暴露TM4细胞凋亡的影响 |
| 3.3.5 MCC950对T-2毒素暴露TM4细胞炎性反应的影响 |
| 3.3.6 MCC950对T-2毒素暴露TM4细胞中ROS含量的影响 |
| 3.3.7 MCC950对T-2毒素暴露TM4细胞NLRP3 炎性小体的影响 |
| 3.4 NAC对T-2毒素暴露TM4细胞毒性的影响 |
| 3.4.1 NAC干预剂量的确定 |
| 3.4.2 NAC对T-2毒素暴露TM4细胞活性的影响 |
| 3.4.3 NAC对T-2毒素暴露TM4细胞功能的影响 |
| 3.4.4 NAC对T-2毒素暴露TM4细胞凋亡的影响 |
| 3.4.5 NAC对T-2毒素暴露TM4细胞炎性反应的影响 |
| 3.4.6 NAC对T-2毒素暴露TM4细胞中ROS含量的影响 |
| 3.4.7 NAC对T-2毒素暴露TM4细胞NLRP3炎性小体的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 试验处理条件的确定 |
| 4.1.1 雄性小鼠T-2毒素处理条件的确定 |
| 4.1.2 TM4细胞T-2毒素处理条件的确定 |
| 4.1.3 MCC950和NAC干预试验条件的确定 |
| 4.2 T-2毒素对雄性小鼠的毒性作用 |
| 4.3 T-2毒素中毒对雄性小鼠生育力的影响 |
| 4.4 T-2毒素对睾丸损伤的影响 |
| 4.4.1 T-2毒素对睾丸结构的影响 |
| 4.4.2 T-2毒素对BTB的影响 |
| 4.4.3 T-2毒素对小鼠精子发生的影响 |
| 4.4.4 T-2毒素对小鼠睾酮合成的影响 |
| 4.5T-2毒素对睾丸炎性反应的影响 |
| 4.5.1 NLRP3炎性小体对T-2毒素诱导的睾丸炎性反应的调节作用 |
| 4.5.2 ROS对T-2毒素导致NLRP3 炎性小体活化的介导作用 |
| 4.5.3 T-2毒素导致睾丸组织和TM4细胞中氧化损伤 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
（5）曾庆琪教授辨治男性不育症的学术思想及润精汤治疗少弱精子症的临床和实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 中医药治疗少弱精子症的研究进展 |
| 1 病因病机 |
| 2 辨证施治 |
| 2.1 名家经验 |
| 2.2 辨精论治 |
| 3 临床研究 |
| 3.1 专病专方 |
| 3.2 中成药 |
| 3.3 针灸及物理治疗 |
| 3.4 中西医结合治疗 |
| 3.5 综合治疗 |
| 4 实验研究 |
| 4.1 降低生殖细胞凋亡 |
| 4.2 改变Catsper通道 |
| 4.3 抗氧化应激损伤 |
| 4.4 调节生殖性腺轴,改善生殖内分泌功能 |
| 4.5 改善睾丸微循环 |
| 4.6 改善附属性腺的分泌功能 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 第二部分 曾庆琪教授辨治男性不育症学术思想 |
| 1 病因病机 |
| 2 辨病论治 |
| 2.1 特发性不育症 |
| 2.2 精液不液化 |
| 2.3 感染性不育症 |
| 2.4 免疫性不育 |
| 2.5 精索静脉曲张性不育症 |
| 2.6 其他原因引起不育症 |
| 3 用药规律 |
| 3.1 用药特点 |
| 3.2 常用效验对药、角药 |
| 4 预防调护 |
| 4.1 三步四法、助孕有道 |
| 4.2 生活指导、综合治疗 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 第三部分 润精汤治疗特发性少弱精子症的临床研究 |
| 1 研究对象 |
| 1.1 临床来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 脱落标准 |
| 1.6 剔除标准 |
| 1.7 终止标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 试验方法 |
| 2.2 给药方案 |
| 2.3 治疗方法 |
| 2.4 注意事项 |
| 2.5 观察指标 |
| 2.6 疗效评价 |
| 2.7 统计学方法 |
| 2.8 设计路线图 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 一般资料分析 |
| 3.2 精液参数比较 |
| 3.3 血清性激素水平比较 |
| 3.4 中医症状评分比较 |
| 3.5 临床疗效比较 |
| 3.6 安全性观察 |
| 3.7 不良反应比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 润精汤组方思路 |
| 4.2 润精汤单味药的分析和现代药理研究 |
| 4.3 还少胶囊作为阳性对照药物的选择依据 |
| 4.4 润精汤对特发性少弱精子症的临床疗效探讨 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 第四部分 润精汤对奥硝唑诱导的少弱精子症大鼠的实验研究 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验药物 |
| 2.3 实验试剂 |
| 2.4 主要试剂的配制 |
| 2.5 实验仪器及耗材 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 分组与给药 |
| 3.2 实验取材 |
| 3.3 实验内容 |
| 3.4 统计方法 |
| 3.5 技术路线图 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 精液参数比较 |
| 4.2 血清性激素水平比较 |
| 4.3 睾丸组织病理形态比较 |
| 4.4 睾丸组织细胞凋亡比较 |
| 4.5 睾丸组织波形蛋白表达比较 |
| 4.6 睾丸组织ERK信号通路比较 |
| 5 讨论 |
| 5.1 奥硝唑诱导少弱精子症模型的建立 |
| 5.2 润精汤改善奥硝唑诱导的生精障碍型SD雄性大鼠生精功能的作用机制 |
| 6 结语 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 附录 |
| 附录1 润精汤治疗特发性少弱精子症临床观察表 |
| 附录2 润精汤治疗特发性少弱精子症中医症状评分表 |
| 附录3 润精汤治疗特发性少弱精子症患者知情同意书 |
| 附录4 常用英文缩略表 |
| 攻读博士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（6）“秩边透水道”针法对少弱精症大鼠精液质量的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略语表 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（7）高脂饮食诱导性肥胖对雄性SD大鼠下丘脑—垂体—睾丸性腺轴影响及机制的研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 生物信息学方法研究高脂饮食诱导性肥胖对雄性SD大鼠新陈代谢的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 数据下载及获得 |
| 2.2 差异表达基因的获得 |
| 2.3 GO和KEGG的分析 |
| 2.4 构建蛋白互作网络 |
| 3 结果 |
| 3.1 差异表达基因 |
| 3.2 差异表达基因的GO富集分析和KEGG通路富集分析 |
| 3.3 差异表达基因的PPI网络及重要基因 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 高脂饮食诱导性肥胖对雄性SD大鼠的神经-生殖内分泌代谢及生精功能的影响 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验动物与饲料 |
| 2.2 主要实验试剂 |
| 2.3 主要实验仪器 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 肥胖大鼠模型制备 |
| 3.2 配置3%戊巴比妥钠溶液 |
| 3.3 动物麻醉及取材 |
| 3.4 血清相关指标测定 |
| 3.5 精子悬液制备 |
| 3.6 睾丸取材 |
| 3.7 睾丸组织块包埋 |
| 3.8 石蜡切片 |
| 3.9 HE常规染色 |
| 3.10 光学显微镜下观察睾丸组织病理结构 |
| 3.11 睾丸组织生精细胞凋亡检测 |
| 3.12 睾丸组织匀浆液的制备及蛋白含量的测定 |
| 3.13 睾丸组织SOD活力测定 |
| 3.14 睾丸组织MDA含量测定 |
| 4 统计学分析 |
| 5 实验结果 |
| 5.1 大鼠一般代谢指标测定结果 |
| 5.2 大鼠神经-生殖内分泌激素的测定 |
| 5.3 大鼠睾丸组织HE染色切片并Johnsen评分 |
| 5.4 TUNEL法测定睾丸组织生精细胞凋亡结果 |
| 5.5 大鼠睾丸组织SOD活力、MDA浓度检测结果 |
| 5.6 精子数目、活力、前向运动力的测定 |
| 6 讨论 |
| 6.1 高脂饮食诱导的肥胖对一般代谢指标的影响 |
| 6.2 高脂饮食诱导的肥胖对神经—生殖内分泌的影响 |
| 6.3 肥胖对大鼠睾丸组织结构形态学的影响 |
| 6.4 肥胖对大鼠睾丸组织生精细胞凋亡的影响 |
| 6.5 肥胖对大鼠睾丸组织SOD活力、MDA浓度的影响 |
| 6.6 高脂饮食诱导的肥胖对精子质量的影响 |
| 参考文献 |
| 第三部分 高脂饮食诱导性肥胖导致雄性SD大鼠的下丘脑Kisspeptin-GnRH系统代谢下调 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 主要实验试剂 |
| 2.2 主要实验仪器 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 肥胖大鼠模型建立 |
| 3.2 实验动物取材 |
| 3.3 免疫组化检测大鼠下丘脑Lep R、Kisspeptin、Kiss1 R、GnRH和GnIH表达 |
| 3.4 Western Blot检测大鼠下丘脑中Lep R,Kisspeptin,Kiss R,GnRH和GnIH蛋白表达量的变化 |
| 3.5 Real Time PCR检测大鼠下丘脑弓状核中Lep R,Kiss1,Kiss R,GnRH和GnIH基因表达量的变化 |
| 4 统计学分析 |
| 5 实验结果 |
| 5.1 下丘脑组织Lep R,kisspeptin,Kiss1 R,GnRH,GnIH免疫组织化学检测结果 |
| 5.2 应用Western-Blot法检测下丘脑组织Lep R,kisspeptin,Kiss1 R,GnRH,GnIH蛋白含量的结果 |
| 5.3 应用qRT-PCR法检测下丘脑Lep R,kisspeptin,Kiss1 R,GnRH,GnIH基因表达量的结果 |
| 6 讨论 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 综述:肥胖对男性生殖相关影响的研究进展 |
| 1 肥胖的定义及男性生殖力评估指标 |
| 2 肥胖对男性生育力的影响 |
| 2.1 物理因素 |
| 2.2 神经-生殖内分泌因素 |
| 2.3 基因因素 |
| 2.4 氧化应激对精子DNA的损伤 |
| 2.5 微量元素对生殖功能的影响 |
| 3 展望 |
| 参考文献 |
| 个人简历及发表论文 |
| 致谢 |
（8）异常黏液质型阳痿神经内分泌改变的临床基础及实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究内容与方法 |
| 1. 异常黏液质型阳痿患者性腺轴、肾上腺轴及甲状腺轴激素研究 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 实验材料 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 统计分析 |
| 2. 异常黏液质型阳痿大鼠甲状腺轴研究 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学位论文 |
| 导师评阅表 |
（10）精液细胞学分析在诊断无精子症中的应用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写表 |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 一、无精子症 |
| （一） 无精子症定义 |
| （二） 无精子症分类 |
| （三） 无精子症病因 |
| （四） 无精子症诊断 |
| （五） 无精子症辅助生殖技术 |
| 二、精液细胞学 |
| （一） 生精细胞 |
| 1、精原细胞 |
| 2、初级精母细胞 |
| 3、次级精母细胞 |
| 4、精子细胞 |
| 5、精子 |
| （二） 非生精细胞 |
| 三、精液细胞学检查评价无精子症研究进展 |
| 第二章 实验材料和方法 |
| 一、主要试剂和仪器 |
| （一） 主要试剂 |
| （二） 主要仪器 |
| 二、实验方法 |
| （一） 研究对象 |
| （二） 睾丸体积测定 |
| （三） 样本收集 |
| （四） 精液常规分析 |
| （五） 精液pH 值检测 |
| （六） 精液细胞学检测方法 |
| （七） 睾丸细针穿刺吸液细胞学分析 |
| （八） 精浆果糖含量检测 |
| （九） 精浆中性α-糖苷酶活性检测 |
| （十） 生殖激素测定 |
| （十一） 染色体核型分析 |
| （十二） AZF 基因检测 |
| 三、统计方法 |
| 第三章 结果 |
| 一、无精子症发生率 |
| 二、精液生精细胞形态 |
| 三、242 例无精子症患者精液细胞学分析 |
| 四、精液细胞学分析诊断梗阻性无精子症中的应用 |
| 五、精液细胞学分析诊断非梗阻性无精子症中的应用 |
| 六、精液细胞学与睾丸细针穿刺生精细胞比较 |
| 七、精液细胞学分析与其它参数的关系 |
| 八、克氏症患者精液细胞学分析 |
| 九、Y 染色体微缺失不育患者精液细胞学分析 |
| 第四章 讨论 |
| 一、无精子症发生率 |
| 二、精液生精细胞分析 |
| 三、精液细胞学分析诊断梗阻性无精子症的意义 |
| 四、精液细胞学分析诊断非梗阻性无精子症中的意义 |
| 五、精液细胞学分析与其它指标的关系 |
| 六、精液细胞学分析在克氏症、Y 染色体微缺失不育患者中的应用 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
四、精浆睾酮水平放射免疫分析方法（论文参考文献）
- [1]用体外器官培养方法研究EDCs对新生小鼠睾丸的影响[J]. 吕凡,蔡秋莹,李育林,汤晓月,任冬霞,李云. 现代预防医学, 2021(09)
- [2]归肾丸加味治疗男性不育症肾阴亏虚证的疗效观察[J]. 张自强,孙永康,刘建涛,杨万期. 辽宁中医杂志, 2021(05)
- [3]补肾生精法治疗少弱精子症及其调控生精细胞增殖与凋亡的研究[D]. 管斯琪. 北京中医药大学, 2020(04)
- [4]T-2毒素对小鼠睾丸的炎性损伤作用及ROS/NLRP3炎性小体活化的调控机制[D]. 杨旭. 东北农业大学, 2020
- [5]曾庆琪教授辨治男性不育症的学术思想及润精汤治疗少弱精子症的临床和实验研究[D]. 杨凯. 南京中医药大学, 2020
- [6]“秩边透水道”针法对少弱精症大鼠精液质量的影响[D]. 姜会真. 山西中医药大学, 2019(01)
- [7]高脂饮食诱导性肥胖对雄性SD大鼠下丘脑—垂体—睾丸性腺轴影响及机制的研究[D]. 贾艳飞. 北京协和医学院, 2017(11)
- [8]异常黏液质型阳痿神经内分泌改变的临床基础及实验研究[D]. 阿卜杜热伊木江·如则. 新疆医科大学, 2016(12)
- [9]人精浆中端粒酶活性测定及其临床意义[J]. 高菊兴,张纪云. 山东医学高等专科学校学报, 2011(01)
- [10]精液细胞学分析在诊断无精子症中的应用研究[D]. 高健. 东北师范大学, 2010(02)