一、幽门螺杆菌感染与胃癌发生发展的关系（论文文献综述）
于雅丽,李振华,牛学恩,李宾[1]（2021）在《血清IL-8表达水平和IL-8-251A/T基因多态性及幽门螺杆菌感染与胃癌发生的相关性》文中研究说明目的探讨血清白细胞介素-8（IL-8）水平、IL-8-251A/T基因多态性和幽门螺杆菌感染与胃癌发生的相关性。方法选择2016年3月-2019年3月在郑州市第七人民医院进行胃部内镜筛查以及住院患者作为研究对象,其中胃癌患者167例（胃癌组）,包括幽门螺杆菌感染104例、无幽门螺杆菌感染63例;正常对照者219例（对照组）,包括幽门螺杆菌感染78例、无幽门螺杆菌感染141例。检测两组受试者胃液中IL-8水平以及IL-8-251A/T基因多态性分布情况,并进行比较分析。结果胃癌组患者胃液中IL-8水平为（15.21±3.15）μmol/L,高于对照组（11.56±2.74）μmol/L,差异有统计学意义（t=12.150,P=0.000）。胃癌组患者幽门螺杆菌感染阳性率为62.28%,显着高于对照组35.62%,差异有统计学意义（χ2=27.023,P=0.000）,且胃癌组与对照组受试者IL-8-251A/T基因型分布以及IL-8-251A/T等位基因分布差异均有统计学意义（P<0.05）。在同组受试者中,HP感染阳性患者IL-8表达水平显着高于HP感染阴性患者,差异有统计学意义（P<0.05）;同时AA基因型IL-8表达水平显着高于AT基因型与TT基因型,AT基因型IL-8表达水平显着高于TT基因型,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论幽门螺杆菌感染以及IL-8-251A/T基因多态性与胃癌的发生密切相关,其中伴有幽门螺杆菌感染IL-8-251AA基因型患者胃液中IL-8分泌显着增强,提示IL-8-251AA基因型且伴有幽门螺杆菌感染患者可能发生胃癌的风险更高。
叶立功,许佩[2]（2021）在《幽门螺杆菌感染胃癌患者外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体的表达及其临床意义》文中指出目的探讨幽门螺旋杆菌感染胃癌患者外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NOD-like receptor protein 3,NLRP3）炎症小体的表达及其临床意义。方法选取2014年1月至2015年2月于新疆军区总医院治疗的50例胃癌患者纳入研究组、50例胃炎患者纳入对照组,选取同期于该院体检的健康者38例纳入健康对照组。采用14C呼气试验测定研究组患者幽门螺杆菌感染情况,并根据幽门螺杆菌表达水平将研究组患者分为A组（幽门螺杆菌<15,23例）和B组（幽门螺杆菌≥15,27例）。比较3组研究对象NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein,ASC）、胱天蛋白酶-1（cysteine aspartic acid specific protease-1,caspase-1）mRNA及白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白介素-18（interleukin-18,IL-18）表达水平,采用Pearson相关性分析探讨NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18表达与幽门螺杆菌感染量的关系,绘制受试者操作特征曲线探讨NLRP3、ASC、caspase-1对胃癌的诊断价值。采用K-M法进行生存分析,log-rank检验比较不同幽门螺杆菌感染量患者生存时间的差异。结果 3组研究对象NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA及IL-1β、IL-18表达水平比较差异均有统计学意义（均P <0.05）,其表达水平均为研究组>对照组>健康对照组。Pearson相关性分析结果显示,NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA及IL-1β、IL-18表达水平与幽门螺杆菌感染量均呈正相关（r=0.766、0.703、0.720、0.736、0.717,均P <0.05）。NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA联合诊断胃癌的曲线下面积为0.957,灵敏度和特异度分别为92.59%和91.30%。A组患者5年生存率显着高于B组（P <0.05）。结论幽门螺杆菌感染性胃癌患者NLRP3炎症小体及其相关炎性因子表达上调,其表达水平可作为幽门螺杆菌感染性胃癌早期诊断和预后判断的潜在肿瘤标志物。
朱健康,帕力达·帕拉哈提,王义霞[3]（2021）在《幽门螺杆菌及其细胞毒素相关蛋白A与胃癌形成的关系分析》文中研究表明目的分析幽门螺杆菌及其细胞毒素相关蛋白A与胃癌形成的关系。方法共选取2019年5月—2020年9月的消化道疾病患者150例组织参与研究,根据疾病分为3组,分别为:胃癌组:胃癌患者50例、非肿瘤消化道疾病组:胃炎50例、胃溃疡50例。每组维族、汉族患者各25例。比较胃癌、非胃癌消化道疾病与幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A的关系,及根治幽门螺杆菌与降低胃癌发生的关系。结果胃癌组幽门螺杆菌阳性率为94.00%,明显高于胃炎的70.00%、胃溃疡的72.00%,差异有统计学意义（χ2=9.756、8.575,P=0.002、0.003）,幽门螺杆菌抗体细胞毒素相关蛋白A阳性率为82.00%,明显高于非肿瘤消化道疾病组的63.00%,差异有统计学意义（P<0.05）;胃癌组维族HP感染率高,细胞毒素相关蛋白A抗体阳性率均高于汉族,非肿瘤消化道疾病组中维族感染率高于汉族感染率,差异有统计学意义（P<0.05）;细胞毒素相关蛋白A阳性患者中,胃癌组患者根除HP的有效率明显低于非肿瘤消化道疾病组,差异有统计学意义（P<0.05）。幽门螺杆菌阳性和胃癌的形成之间没有明显的相关性（r=0.105,P>0.05）,而幽门螺杆菌和细胞毒素相关蛋白A同时呈阳性,和胃癌形成之间呈现正相关（r=0.894,P<0.05）。结论幽门螺杆菌细胞毒性相关蛋白A可增加患胃癌的风险,且根除幽门螺杆菌治疗更有利于减少胃癌的发生,保证患者的安全。
赵张颖[4]（2021）在《儿童幽门螺杆菌感染对全血锌、铁、钙、铜变化及对缺铁性贫血发生关系探讨》文中提出目的:通过研究儿童幽门螺杆菌感染后与体内锌、铁、钙、铜变化、缺铁性贫血（IDA）是否存在相关性,从而为今后的临床工作提供理论依据。方法:2019年9月-2021年2月在延安大学附属医院儿科门诊及住院就诊的5-13岁儿童,选取有消化道症状（包括反复腹痛、恶心呕吐、食欲不振等）常规治疗效果不佳且腹部B超或CT检查无明显异常的儿童125例,其中男68例,女57例。所有儿童均行13C尿素呼气试验、部分儿童行组织学检查诊断是否存在Hp感染,存在Hp感染儿童共28例。通过电化学分析法测定两组儿童中微量元素锌（Zn）、铁（Fe）、钙（Ca）、铜（Cu）的含量。采用血细胞计数仪对三组患儿的血红蛋白（hemoglobin,Hb）、平均红细胞体积（mean corpuscular volume,MCV）、平均红细胞血红蛋白水平（mean corpuscular hemoglobin,MCH）,平均红细胞血红蛋白浓度（mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC）进行检测,运用亚铁嗪比色法检测血清铁（serum iron,SI）,运用电化学发光免疫分析法检测血清铁蛋白（serum ferritin,SF）。使用SPSS.25统计软件分析两组儿童中微量元素Zn、Fe、Ca、Cu、Hb、MCV、MCH、MCHC、SI、SF水平的变化。结果:1.Hp阳性组和Hp阴性组中儿童年龄比较,差异有统计学意义（P<0.05）。两组儿童性别比较,差异无统计学意义（P>0.05）。2.Hp阳性组锌、铁含量低于Hp阴性组,差异有统计学意义（P<0.05）;Hp阳性组和Hp阴性组钙、铜含量比较,差异无统计学意义（P>0.05）。3.Hp阳性组中锌、铁的缺乏率分别为71.4%、32.1%,Hp阴性组中锌、铁的缺乏率为29.8%、10.3%,差异有统计学意义（P<0.05）,两组钙、铜缺乏率比较差异无统计学意义（P>0.05）。4.Hp阳性组Hb、MCV、MCH、MCHC、SI、SF均低于Hp阴性组,差异有统计学意义（P<0.05）。5.Hp阳性组和Hp阴性组中缺铁性贫血检出率比较,差异有统计学意义（P<0.05）。Hp阳性组儿童缺铁性贫血检出率高于Hp阴性组。结论:1.幽门螺杆菌感染与年龄有关,随着年龄的增长,幽门螺杆菌感染阳性率升高;幽门螺杆菌感染与性别无关。2.幽门螺杆菌感染时可导致人体内锌、铁元素缺乏,当存在幽门螺杆菌感染的儿童有必要进行微量元素检查,及时给予相应的治疗,从而避免对儿童的生长发育造成影响。3.幽门螺杆菌感染与缺铁性贫血有关,幽门螺杆菌感染可能是引起缺铁性贫血发生的原因,临床上对于原因不明的缺铁性贫血患儿应进行幽门螺杆菌检测。
易惺钱[5]（2021）在《基于扶正祛邪理论的中医药治疗幽门螺杆菌感染相关疾病的证治规律研究》文中研究指明背景:幽门螺杆菌（Helicobator Pylori,Hp）是目前公认的唯一能在人体胃中生存的微生物种类,感染了全球50%以上的人口,是导致胃炎、消化性溃疡、胃癌等消化道疾病的重要因素,且与不明原因的缺铁性贫血、特发性血小板减少性紫癜、糖尿病、慢性荨麻疹等胃肠外疾病相关,因此抗Hp治疗早已成为共识。我国作为发展中国家,Hp感染和胃癌双重高发,二者关系密切,危害相互叠加,其治疗是消化科医生最关注的问题。目前临床多采用质子泵抑制剂和铋剂联合两种抗生素的四联疗法,但随着抗生素的不规范使用,细菌耐药率上升,Hp根除率下降,复发率升高,不良反应明显,有效治疗面临着挑战。中医药作为Hp治疗的新路径,具有不良反应小、耐药率低、不易引起肠道菌群失调等特点,与西药联用可提高根除率,减少副作用及抗菌药物使用,保护胃黏膜,在Hp治疗中的地位与作用逐渐被认可。但证据较分散,仍缺乏较全面的中医理论支撑和真实世界的证据支持。目的:1.系统梳理中医药治疗Hp感染相关文献,全面综合当前可用证据,提炼中医药干预Hp的治疗思路。2.结合医案及回顾性队列研究整合中医治法的运用情况、具体方药,评价其临床疗效,优化Hp感染的中医药防治方案。3.在现有证据支持下,进一步揭示中药防治Hp的作用机制与证治规律,为中医药干预Hp感染的优势环节和精准治疗提供证据支持。方法:1.文献梳理与评价系统检索中、英文数据库,同时对纳入文献的参考文献、灰色文献、医脉通等进行补充检索,7名研究者根据纳排标准独立筛选文献、提取数据,采用讨论或求助第三方的方式解决分歧;运用文字描述及图表形式展示中医药抗Hp的研究现状。应用AMSTAR 2量表、GRADE软件对中药治疗Hp感染相关系统评价/Meta分析进行方法学质量、结局指标可靠程度及证据质量再评价。2.临床验证通过有效医案及临床回顾性研究对文献研究结果加以验证。借助古今医案云平台,系统分析中医药治疗Hp感染相关疾病的证治规律;基于真实临床环境中既有医疗数据开展中药联合四联疗法治疗Hp感染相关疾病的回顾性队列研究,评价中医药在真实世界中的疗效及安全性,为中医药干预Hp感染相关疾病提供现实性、适用性和时效性证据支持。结果:1.证据图及理论探讨部分:8个中英文数据库初检共26661篇文献,自动查重后获得16461篇,依据相关排除标准排除不符合文献后最终纳入3563篇,其中临床研究3460篇,系统评价/Meta分析82篇,指南及临床路径研究21篇。从临床研究来看,（1）研究类型以随机对照试验为主（80.72%）,规模多在60-100例之间;观察性研究占7.63%,多集中在Hp感染与中医证型的相关性及Hp感染相关疾病中医证型分布特点方面,其与体质类型的研究相对较少,仅占0.55%;（2）研究人群与现代医学对Hp感染特定人群处理意见一致,中医药在儿童（<14岁）及老年人（>70岁）研究相对较少。（3）干预方案多为中医药与西药联用,单用相对较少,半夏泻心汤、黄连温胆汤、黄芪建中汤、六君子汤等经方应用广泛;（4）结局指标以Hp转阴、临床症状改善、胃镜病理疗效及安全性等为临床主要指标,与中医辨证论治水平相关的中医证候疗效指标相对较少;在系统评价/Meta分析方面,76篇中医疗法干预Hp相关性疾病的系统评价/Meta分析再评价结果显示,虽多数结论认为中医药有潜在疗效,但受原始研究方法学质量影响,证据质量参差不齐,高质量证据较少,难以得出较肯定的结论。在指南共识上,我国陆续颁布了五次Hp诊治共识意见或指南,为Hp治疗提供了方向;2012年第四次全国Hp感染诊治共识建议可将中药用于Hp感染的治疗,中药以其独特优势成为Hp治疗的新路径;2018年《全国中西医整合治疗Hp相关“病-证”共识》的发布,为难治性Hp感染提供了中国思路。通过系统梳理当前可获得的相关证据,总的来说,中医认为Hp为湿热毒邪,其感染与脾胃虚弱密切相关,邪毒内犯,正虚邪实为基本病机,扶正祛邪为基本治则,健脾益气以扶正,清热祛湿以祛邪,并施以根除Hp。2.再评价部分:中英文8个数据库中共检索出256篇中药治疗Hp相关疾病的系统评价/Meta分析,纳入40篇文献按扶正、祛邪、扶正祛湿兼施不同干预方式对其结局指标进行证据质量评定。纳入文献中7篇以扶正为主,黄芪建中汤、香砂六君子汤、香砂养胃丸为常用方剂;祛邪为主的17篇,辛开苦降、清热祛湿为抑杀Hp之大法,常用半夏泻心汤、左金丸、黄连温胆汤;扶正祛邪兼施的16篇,治以胃复春、荆花胃康、柴胡舒肝散等中药制剂。自2012年以来中药抗Hp相关系统评价逐年增多,Hp根除（转阴、清除）率、总有效率、胃镜病理疗效及不良反应发生率为主要观察指标,但受系统评价制作全过程的影响,方法学质量均为“极低”,证据质量为中、低级或极低,缺乏高质量证据。3.医案分析部分:古今医案云平台共检出158则医案,对符合纳入标准的72则医案进行分析,共177诊次,涉及45首处方、241味中药。其中,甘草、黄连、白术、茯苓、陈皮、党参、蒲公英等为高频药物。所用药物功效以清热解毒、燥湿化痰、清热燥湿、泻火解毒为主,清热药使用频次最高,其次是理气药和补虚药。从性味归经看,多用温、平、寒之性,苦、甘、辛味,主入脾、胃、肺经的中药,核心处方为芍药甘草汤和六君子加减。4.临床回顾性研究部分:（1）共纳入283例Hp感染患者,其中中药联合四联疗法治疗患者（暴露组）114例,单用四联疗法（非暴露组）169例,治疗后暴露组Hp根除率为80.7%（92/114）,非暴露组69.8%（118/169）,差异有统计学意义（P<0.05）。按服用四联药物的疗程分为7、10、14、14-42天及42天以上5个组,分析显示不同疗程与Hp根除无统计学差异（P=0.84）。283例患者中10例在Hp根除后3个月至2年内进行了复查,除暴露组1例为2年后复查呼气试验结果为阳性外,其他均为阴性;难治性Hp感染患者3例,其疗效可能与抗生素耐药有关;（2）暴露组96例使用中药汤剂患者111诊次中药用药数据分析显示,中药使用总频次1437次,包括不同中药252味,甘草、半夏、党参、茯苓、白术等使用频次较高。按功效分类以清热解毒、燥湿化痰、补中益气为主,其中清热药使用频次最高、化痰药、补虚药次之。四气以温、平、微寒为主,甘、辛、苦味居多,主入脾、胃、肺经,临床使用的核心处方为六君子汤和黄芩汤加减。结论:Hp属于中医的湿热邪气,其感染与宿体脾胃虚弱、Hp毒邪（菌株）的致病性密切相关。中医药以扶正祛邪为基本治则,在Hp感染患者初次治疗、补救治疗及根除后等不同时期发挥治疗作用。结合患者的具体情况,或健脾和胃、补益气血（扶正,正气旺而不受邪）,或清热解毒、清热燥湿（祛邪,邪去正自安）,或攻补兼施,双管齐下,发挥抗Hp的同时,调节肠道正常菌群,修复受损胃黏膜,提高机体免疫力。扶正寓祛邪,祛邪而不伤正,成为根除Hp治疗的新路径和策略,单用或与西药联用提高根除率,缓解临床症状,造福患者。
徐孝龙[6]（2021）在《血脂水平与胃息肉的相关性研究》文中提出目的:通过回顾性研究分析血脂水平与胃息肉的关系,探讨血脂是否为胃息肉的危险因素之一,从而为预防胃息肉发生、发展提供重要的参考和指导。方法:选取2018年1月1日至2020年1月1日在南昌大学第四附属医院消化内科住院患者,患者经胃镜及病理检查确诊为胃息肉患者100例,同时选择胃镜下确诊为非萎缩性胃炎患者100例,作为本次实验研究对象。根据有无息肉分为观察组和对照组,要求观察组和对照组的年龄相近、性别相匹配。观察组根据不同病理类型再分为:胃底腺息肉组、增生性息肉组及腺瘤性息肉组。收集患者的一般情况（性别、年龄、身高、体重及既往史等）,记录患者是否有高血压病、2型糖尿病、幽门螺杆菌（HP）感染情况及总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平,同时记录息肉的病理结果、部位。将以上临床资料整理后进行统计分析,了解血脂水平在不同分组中的情况,推断出血脂是否为胃息肉发生发展的危险因素之一。结果:1、本研究共纳入100例胃息肉患者,其中男性患者占33例,女性患者占67例,男女比例为1:2.03,平均年龄为58.14±11.95岁。2、在胃息肉分布部位中,胃窦部占7例,胃体部占52例,胃底部占41例,其中胃体部占多数;在息肉病理类型中,胃底腺息肉占51例,增生性息肉占45例,腺瘤性息肉占4例,其中胃底腺息肉占多数。3、高血压、2型糖尿病及体质量指数（BMI）在胃息肉组与对照组之间差异无统计学意义,P>0.05;胃息肉组高脂血症发生率高于对照组,差异有统计学意义,P<0.05。4、胃息肉组的血清总胆固醇、甘油三酯均高于对照组,高密度脂蛋白则低于对照组,差异有统计学意义,P<0.05。胃息肉组低密度脂蛋白高于对照组,差异无统计学意义,P>0.05。胃息肉组中胃底腺、增生性、腺瘤性不同病理类型之间血脂水平差异无统计学意义,P>0.05。胃息肉组中胃窦、胃体及胃底不同部位之间血脂水平差异无统计学意义,P>0.05。5、通过Spearman分析得出,总胆固醇、甘油三酯与胃息肉发生均呈正相关性,高密度脂蛋白与胃息肉发生呈负相关性;进一步进行二分类Logistic回归分析得出:甘油三酯≥1.7 mmol/L是胃息肉发生、发展的危险因素,（OR=2.503,CI=1.340～4.675,P=0.004）。6、合并幽门螺杆菌（HP）感染的胃息肉患者高脂血症发生率高于无HP感染组,差异有统计学意义,P<0.05。7、在无幽门螺杆菌（HP）感染条件下,胃息肉组中高脂血症发生率仍高于对照组,且差异有统计学意义,P<0.05。结论:1、胃息肉患者中以中老年女性为主,息肉好发于胃体部,病理类型以胃底腺息肉多见。2、胃息肉的发生与总胆固醇、甘油三酯呈正相关,与高密度脂蛋白呈负相关。3、胃息肉患者血脂水平与幽门螺杆菌感染有关。因此临床中在根除HP的同时监测并控制血脂水平对于预防胃息肉的发生、发展可能有一定意义。
崔秀杰[7]（2021）在《致瘤微生物HPV和H.pylori调控mTOR信号通路介导恶性转化的机制》文中进行了进一步梳理研究背景致瘤微生物（包括病毒或细菌）诱发的慢性感染是导致细胞增殖失控继而诱导恶性转化的重要因素。2012年世界卫生组织/国际癌症研究中心（WHO/IARC）的一项报告指出,世界上约17%癌症发生与某些肿瘤相关病毒或细菌的感染直接有关。研究已证实,高危型人乳头瘤病毒（High-risk Human papillomavirus,HPV）和幽门螺杆菌（Helicobacterpylori,H.pylori）是引发人类癌症的Ⅰ级致癌病原体（HPV和H.pylori占可以引发人类癌症的病原体比例分别为31.5%和22.0%）。宫颈鳞状上皮和胃粘膜上皮细胞的增殖紊乱和恶性转化是环境因子（外因）与宿主调控应答（内因）交互作用的结果。因此,解析HPV和H.pylori感染相关的炎癌转化机制是重要的科学问题,对于有效降低宫颈和胃相关恶性转化的发生具有重要意义。高危型HPV的持续性感染是宫颈癌的主要始动因素。HPV转化基因E6和E7在组织中持续表达,介导宿主肿瘤抑癌蛋白p53和退化视网膜母细胞瘤蛋白pRb的降解。此外,HPV感染可通过导致宿主基因的不稳定性增高、宿主基因甲基化模式改变、非编码RNA的失调等参与推进宫颈细胞恶性转化的过程。H.pylori定植于胃粘膜上皮细胞,可通过调控RUNX3、P53、E-cadherin和β-catenin等致瘤相关分子促进恶性转化,增加胃癌发生的风险。此外,H.pylori感染后其毒力因子CagA通过Ⅳ型分泌系统将肽聚糖注入胃粘膜上皮细胞,引发胃区域感染炎症微环境、刺激宿主遗传物质发生突变,是介导恶性转化的早期趋动力。探究HPV和H.pylori致病机制是早期识别和干预肿瘤的基础性研究工作。HPV和H.pylori感染可通过与宿主细胞中不同的模式识别受体以及信号通路相互作用诱导炎癌转化。HPV除了可以抑制p53和pRb基因表达外,还与主要的上游通路:生长因子受体、Notch受体、Ras和PI3KCA等相互作用激活和改变mTOR信号通路,刺激宿主细胞的存活和增殖,诱导感染细胞的恶性转化。H.pylori感染除了可通过刺激胃粘膜上皮释放细胞因子,还可通过识别NOD样受体、Notch受体和Toll样受体等多种模式识别受体活化NF-κB、Wnt、JNK和mTOR等信号通路,形成H.pylori促进炎性因子表达的正反馈环路,参与调节病原微生物感染的宿主免疫应答和炎症响应,介导非可控性炎症增加炎癌转化的风险。研究证据表明,HPV/H.p感染通过影响mTOR信号通路中的基因突变以及上游信号分子的激活导致mTOR通路活化,而该通路的激活可进一步导致遗传不稳定、增殖失控、凋亡抵抗和代谢特性改变,最终导致感染细胞的恶性转化。mTOR信号通路可能在HPV和H.pylori感染所诱导的恶性转化中发挥重要作用。因此,进一步探究HPV和H.pylori感染激活mTOR信号通路的分子机制以及该通路在HPV和H.pylori诱导恶性转化中的生物学作用,将有助于提高疾病的监测防控,为靶向治疗提供新思路。本研究目的在于:（一）解析HPV-16转化基因E7通过调控miR-106a激活mTOR介导宫颈癌发生发展的功能与机制。（二）解析H.pylori通过调控髓系分化标志基因MYADM激活mTOR介导胃恶性转化的机制。第一部分:HPV-16 E7上调miR-106a靶向LKB1激活mTOR信号通路调控宫颈鳞癌细胞的异常增殖与自噬高危型HPV-16感染与宫颈鳞癌关系最为密切,其转化基因E6和E7的持续表达是导致子宫颈恶性转化的主要病因。E6和E7分别通过降解抑癌因子p53和pRb,导致细胞增殖紊乱、诱导细胞转化。E6和E7还可通过上调转录因子调控宿主microRNAs（miRNAs）影响宿主基因表达,进而破坏细胞生长和生存机制的稳定,导致宫颈恶性转化甚至宫颈癌。miR-106a是miR-17家族的一员,在癌症发生发展中的作用似乎具有组织或细胞特异性。目前有关miR-106a在HPV相关宫颈癌,尤其HPV及其转化基因是否可以调控宿主miR-106a的表达尚不清楚。因此,研究miR-106a在HPV阳性宫颈癌中的作用及机制,对于揭示HPV致癌的分子调控机制,选择有效治疗靶点具有重要的价值。有文献报道mTOR（Mammaliantargetofrapamycin,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白）的激活可能与HPV病毒感染相关。研究表明,宫颈癌中HPV-16 E7能够降低抑癌基因LKB1的表达,而LKB1是mTOR上游关键的节分子。多项研究包括我们课题组以往的研究已报道,LKB1/AMPK/mTOR信号通路在宫颈癌中的作用至关重要,抑癌因子LKB1通过激活其下游AMPK,负向调控mTOR,抑制细胞增殖、转化及迁移等。LKB1也能够通过调控PTEN影响PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制肿瘤进展。然而,在HPV阳性宫颈癌中miR-106a的作用如何,其分子机制是否与LKB1/AMPK/mTOR通路有关?高危HPV-16感染能否对宿主细胞miR-106a表达发挥调控作用?目前尚不清楚。研究目的1.探究miR-106a在HPV-16阳性宫颈鳞状细胞癌组织和细胞系中的表达以及临床意义。2.揭示miR-106a对宫颈癌细胞增殖与自噬的影响及其分子调控机制。3.探究HPV-16转化基因E7对miR-106a的调控作用及机制。方法与结果1.miR-106a在HPV-16阳性宫颈鳞癌组织高表达且与恶性临床病理特征相关。RT-qPCR结果显示,miR-106a在HPV-16阳性宫颈鳞癌组织样本中表达显着升高。ROC曲线显示,miR-106a可以较好地区分宫颈鳞癌组织与非肿瘤组织。miR-106a高表达与宫颈鳞癌的肿瘤直径、高级别FIGO分期、淋巴结转移等呈显着正相关,而与患者年龄和脉管入侵等参数没有明显的相关性;logistic多因素分析显示miR-106a高表达与肿瘤大小、淋巴结转移、淋巴管入侵等因素有关。提示miR-106a可能参与了宫颈癌的发生和发展。2.LKB1是miR-106a在HPV-16阳性宫颈癌中的新靶点。生物信息学网站预测交叉结果获得98个miR-106a的潜在靶基因,其中LKB1引起我们的关注。荧光素酶报告基因实验显示LKB1是miR-106a的直接靶点;RT-qPCR结果显示,与对照细胞HaCaT相比,宫颈癌细胞系（CaSki、SiHa和HeLa）中miR-106a表达升高,尤其在HPV-16阳性CaSki中升高最显着。RT-qPCR和Western blot结果表明,miR-106a可负向调控LKB1表达。RT-qPCR结果显示,LKB1在HPV-16阳性宫颈鳞癌组织样本中表达显着降低。Spearman相关性分析显示,LKB1与miR-106a表达高度负相关。临床病理学参数相关性分析显示,LKB1低表达与宫颈癌患者恶性病理学特征相关。以上结果显示,LKB1是miR-106a的直接靶点。3.miR-106a通过靶向LKB1促进宫颈癌CaSki细胞增殖。CCK-8、平板克隆和EdU实验结果显示,miR-106a显着促进宫颈癌CaSki细胞的增殖,而LKB1抑制宫颈癌细胞增殖;但在宫颈癌SiHa和HeLa细胞（两者均LKB1表达缺失）中miR-106a促进增殖作用较弱。在CaSki细胞中采用LKB1的rescue实验进一步验证,平板克隆和EdU结果均显示,LKB1可逆转miR-106a对宫颈癌细胞CaSki的促进增殖作用。以上实验证实miR-106a通过靶向LKB1促进宫颈癌CaSki细胞的增殖。4.miR-106a通过靶向LKB1负性调控HPV-16阳性宫颈癌细胞自噬。Western blot结果显示,miR-106a抑制宫颈癌细胞自噬,而LKB1促进宫颈癌细胞自噬;并且miR-106a可以抑制雷帕霉素、饥饿诱导的细胞自噬。但与CaSki细胞相比,在LKB1缺失的SiHa和HeLa细胞中,miR-106a对自噬相关蛋白的影响不明显。进一步LKB1的rescue实验证明,LKB1可以逆转miR-106a对细胞自噬的抑制作用。以上结果说明,miR-106a通过靶向LKB1抑制HPV-16相关宫颈癌的自噬。自噬流检测结果显示,miR-106a可以抑制CaSki细胞中自噬小体（黄色斑点）和自溶溶酶体（红色斑点）的数量,且miR-106a明显抑制了雷帕霉素和饥饿所诱发的自噬流,而LKB1促进宫颈癌细胞的自噬流。以上结果说明miR-106a抑制CaSki细胞自噬是通过靶向LKB1实现的。5.miR-106a通过靶向LKB1激活AMPK-mTOR信号通路。在HPV-16阳性CaSki细胞中,Western blot检测结果显示,miR-106a可以激活mTOR信号通路。LKB1的rescue实验显示,LKB1过表达减弱miR-106a对mTOR表达促进的作用;此外,敲低LKB1可部分逆转敲低miR-106a对mTOR水平的影响。说明在HPV-16阳性CaSki细胞中miR-106a通过靶向LKB1激活AMPK-mTOR信号通路。6.HPV-16 E7激活miR-106a的表达并调控其功能。RT-qPCR结果显示,在HPV-16 E7稳定表达细胞系RPE1-E7和HaCaT-E7中,miR-106a表达显着增加;使用干扰组合（siRNA198和siRNA209）分别选择性地敲低CaSki细胞中HPV-16E6E7和HPV-16E6,观察干扰E7对miR-106a的表达影响。结果显示,与CaSki-siE6细胞相比,miR-106a在CaSki-siE6E7细胞中的表达显着降低。说明敲低E7部分抑制了 miR-106a的表达。此外,RT-qPCR显示,在HPV-16 E7阳性的宫颈鳞癌组织中,miR-106a表达与E7表达呈正相关。RT-qPCR和Western blot结果显示,与空白载体（Vector）相比,上述两种E7-表达细胞中LKB1表达降低;然而,当E7细胞转染miR-106a抑制剂时,LKB1可部分恢复表达,说明E7通过激活miR-106a抑制LKB1表达。在E7表达细胞中,CCK-8细胞增殖活性明显高于空载体细胞。而转染miR-106a抑制剂后,E7细胞的细胞增殖率降低。说明HPV-16E7可以激活miR-106a的表达并调控其增殖功能。7.HPV-16 E7通过激活转录因子c-Jun上调miR-106a表达。RT-qPCR和Western blot结果显示,c-Jun在E7-表达的RPE1和HaCaT细胞中表达显着升高;CaSki敲低E7（采用的干扰组合策略同前）,c-Jun表达降低,敲低c-Jun后,miR-106a表达随之降低。c-Jun的rescue实验显示,c-Jun可以部分逆转E7敲低后引起的miR-106a表达降低。CHIP-PCR实验结果显示,c-Jun可以直接结合到miR-106a的启动子区调控miR-106a转录。以上实验结果证明,HPV-16 E7通过上调转录因子c-Jun表达促进宫颈癌中miR-106a的转录。结论和意义在本研究中,我们系统地讨论了 miR-106a在HPV-16阳性宫颈癌中的作用及其分子机制。miR-106a在HPV-16阳性宫颈鳞癌组织和细胞中高表达,而且与患者恶性病理学特征相关。研究发现抑癌基因LKB1是miR-106a的新靶点,miR-106a通过靶向抑制LKB1激活AMPK-mTOR信号通路促进宫颈癌细胞增殖抑制自噬进而发挥致癌作用。此外,HPV-16E7通过转录因子c-Jun可上调miR-106a的表达并促进细胞增殖功能。本研究为进一步阐明HPV-16致癌的分子机制,寻找HPV相关宫颈癌的治疗新靶点提供了新的实验依据。第二部分:H.pylori通过NF-κB上调MYADM激活mTOR信号通路介导胃恶性转化幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）感染引发的炎症是介导恶性转化的重要基础。H.pylori定植于胃粘膜上皮细胞通过上调NF-κB、AP-1和IRFs等转录因子,进一步诱导IL-1β、IL-8和TNF-α等炎癌跨越细胞因子产生,激活下游NF-κB、Wnt/β-Catenin、EGFR、FAK和mTOR等信号通路,形成H.pylori促进炎性因子表达的正反馈环路,增加炎癌转化风险。MYADM（Myeloid-associated differentiation marker,髓系相关分化标记基因）是近年来鉴定得到的一种在多能祖细胞中表达、并在髓系分化过程中上调的造血相关标记基因。相关研究显示,MYADM可编码蛋白酪氨酸激酶FAK亚家族,在多种炎症以及肿瘤中表达异常。例如,在非酒精性脂肪肝病从单纯性脂肪肝到脂肪变性、炎症和坏死再到肝硬化的演变过程中,MYADM的表达逐渐升高。MYADM在黑色素瘤、激素抵抗型前列腺癌以及结直肠癌等肿瘤中高表达且与肿瘤转移以及不良预后有关。然而,MYADM在胃部恶性转化中的表达变化和生物学功能,以及是否与H.p感染相关尚未有报道。研究表明,H.pylori感染可激活PI3K/Akt/mTOR信号通路促进胃上皮细胞增殖。然而,在H.pylori感染的胃粘膜上皮组织、细胞中MYADM的表达以及功能如何?H.pylori感染能否调控宿主细胞MYADM表达以及调控机制如何?下游分子机制是否与PI3K/Akt/mTOR通路有关?目前尚不清楚。研究目的1.探究MYADM在H.pylori感染相关恶性转化中的表达变化及其临床意义。2.探究H.pylori是否可以调控MYADM的表达以及其分子机制。3.揭示MYADM在胃恶性转化中的作用和分子机制。方法与结果1.MYADM在胃癌组织和细胞中表达上调。Oncomine、GEO、TCGA生物信息学分析发现,与正常组织相比,MYADM在胃癌中表达显着上调。RT-qPCR结果显示,与癌旁组织相比,胃癌组织中MYADM表达显着升高;与人慢性萎缩性胃炎组织相比,胃癌组织中MYADM表达明显升高;MYADM在胃癌细胞系中表达高于人永生化胃粘膜上皮细胞GSE-1;Western blot结果显示,与相对应癌旁组织样本相比,胃癌组织中MYADM蛋白表达明显升高。以上结果表明MYADM在胃癌组织和细胞中高表达。2.MYADM高表达与胃癌进展以及胃癌病人预后不良相关。IHC结果显示,MYADM表达随胃炎到胃癌进展过程呈现表达逐渐升高的趋势;与癌旁组织相比,MYADM在胃癌组织中表达明显升高。TCGA和GEO数据库（GSE15459、GSE62254、GSE15459,GSE62254 和 GSE22377）生存曲线分析结果表明,MYADM高表达的胃癌患者总生存期（OS）、无进展生存期（RFS）再次进展生存期（PPS）显着低于MYADM低表达患者。以上结果显示,MYADM高表达与胃炎到胃部恶性转化以及胃癌患者不良预后之间具有潜在关系。3.MYADM促进体内外胃癌细胞的增殖、侵袭、迁移以及局部浸润能力。平板克隆、CCK-8和EdU结果显示,MYADM促进胃癌细胞增殖能力;Transwell小室和划痕实验表明,MYADM促进胃癌细胞体外的迁移、侵袭能力;Western blot结果显示,MYADM抑制胃癌细胞EMT过程。裸鼠皮下成瘤实验显示,与对照组Lv-shNC相比,Lv-shMYADM组裸鼠皮下成瘤生长速度明显慢于Lv-shNC组,瘤体较小、重量较轻;RT-qPCR结果显示MYADM在Lv-shMYADM组裸鼠瘤体表达显着低于Lv-shNC组。裸鼠尾静脉注射实验显示,与Lv-shNC组相比,Lv-shMYADM组裸鼠肺转移灶较少,荧光信号明显减弱;HE染色显示,在Lv-shNC组出现瘤体包膜破坏和局部浸润现象,部分肿瘤侵犯到瘤体周围肌肉组织。而Lv-shMYADM组裸鼠瘤体包膜完整,没有明显浸润情况;并且IHC结果显示MYADM和ki67蛋白在Lv-shMYADM组表达阳性率低于对照组。以上数据提示,MYADM与胃癌的异常增殖、迁移、侵袭相关,MYADM在体内可以促进胃癌细胞成瘤以及发生局部浸润、转移的能力。4.MYADM 激活 PI3K/Akt/mTOR 信号通路。Western blot 实验结果发现,敲低 MYADM 后,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K 和 p-4E-BP1 蛋白表达水平降低,PI3K、AKT、mTOR、p70S6K 和 4E-BP1总蛋白表达变化不明显;相反,过表达MYADM后,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K 和 p-4E-BP1 蛋白表达水平升高,PI3K、AKT、mTOR、p70S6K和4E-BP1总蛋白表达变化不明显。以上结果显示,MYADM可能通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路影响胃癌细胞功能。5.幽门螺杆菌感染上调MYADM表达。RT-qPCR和Western blot检测发现,以不同浓度幽门螺杆菌（Hp11637和26695）分别感染GES-1、AGS和MKN-45细胞不同时间,结果显示MYADM在H.pylori感染后表达升高,并且具有感染的浓度和剂量依赖性。RT-qPCR、IHC检测发现,H.pylori阳性临床胃炎组织中MYADM表达显着高于H.pylori阴性胃炎组织。在幽门螺杆菌SS1单独/联合MNU灌胃小鼠模型中,发现H.pylori SS1单独/联合MNU感染组小鼠MYADM表达高于未感染组。以上结果显示,MYADM可能在H.pylori感染可以上调MYADM表达。6.幽门螺杆菌通过NF-κB信号通路激活转录因子c-Jun诱导MYADM表达。PROMO和JASPAR预测调控MYADM的转录因子c-Jun;双荧光素酶报告基因、CHIP-PCR结果表明,c-Jun可以结合到靶基因MYADM启动子区,MYADM是c-Jun直接靶点;RT-qPCR和Western blot结果证明,c-Jun可以正向调控MYADM表达。H.pylori感染GES-1、AGS和MKN-45细胞诱导的MYADM表达上调,而敲低c-Jun可以部分抑制H.pylori感染诱导的MYADM表达上调。以上实验证明,c-Jun在H.pylori感染所介导的MYADM表达上调中起到不可或缺的作用。探究H.pylori上调c-Jun激活MYADM的分子机制,Western blot检测GES-1、AGS和MKN-45细胞中H.pylori相关信号通路抑制剂对MYADM表达的影响,结果显示NF-κB抑制剂Bay11-7082显着抑制H.pylori感染诱导的MYADM表达;RT-qPCR结果显示,Bay1 1-7082可以抑制H.pylori感染GES-1、AGS和MKN-45细胞诱导的MYADM表达上调;Western blot结果显示,加入Bayl1-7082后基本解除了H.pylori感染诱导的c-Jun和MYADM表达上调。以上结果证明,NF-κB信号通路是H.pylori感染后通过激活转录因子c-Jun诱导MYADM表达上调的重要途径。结论与意义在本研究中,我们系统地研究了 MYADM在H.pylori感染相关的恶性转化中的作用及分子机制。MYADM与H.pylori感染相关的胃恶性转化的演进过程相关,且MYADM在H.pylori阳性胃炎以及胃癌组织和细胞中高表达,与胃癌病人预后不良有关。研究发现,H.pylori通过激活NF-κB信号通路上调转录因子c-Jun表达促进MYADM转录,进而激活PI3K/Akt/mTOR信号通路促进胃癌细胞在体内外增殖、侵袭和转移的能力。说明MYADM可能是H.pylori相关胃恶性转化的潜在靶点。以上研究有助于阐明H.pylori致胃恶性转化的新机制,为制定有效的H.pylori相关胃疾病的早期诊断、治疗及发现新靶点提供实验依据。
丁辛[8]（2021）在《连朴饮加减方治疗克拉霉素耐药幽门螺杆菌相关性胃炎的研究》文中研究指明目的1研究幽门螺杆菌病原微生物学特征、致病机制及相关学说,分析幽门螺杆菌感染与中医脾胃湿热证之间的关系,诠释王氏连朴饮治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的作用机制。2研究连朴饮加减方对克拉霉素耐药性幽门螺杆菌的体外抑制效应,与六种常用抗生素进行比较。3研究连朴饮加减方对克拉霉素耐药性幽门螺杆菌幽门螺杆菌相关性胃炎小鼠在体重、小肠长度、血清TNF-α、IL-6浓度、胃粘膜Warthin-Starry银染色上的影响,与抗生素四联疗法进行对比,探讨连朴饮加减方在上述指标上的改善机制。4研究连朴饮加减方对克拉霉素耐药性幽门螺杆菌相关性胃炎小鼠在胆囊胆汁酸代谢上的影响,与抗生素四联疗法进行对比,探讨连朴饮加减方在胆汁酸代谢上的改善机制。5研究连朴饮加减方对克拉霉素耐药性幽门螺杆菌相关性胃炎小鼠在盲肠内容物肠道菌群上的影响,与抗生素四联疗法进行对比,探讨连朴饮加减方在肠道菌群上的改善机制。方法1幽门螺杆菌与王氏连朴饮的相关研究分析汇总幽门螺杆菌的中西医研究成果,研究幽门螺杆菌在流行病学、形态学、菌体动力、生物化学、体内分布、致病机制、致病机理学说上的特征,从病原微生物自身特征及宿主免疫反应两方面阐发幽门螺杆菌感染与中医脾胃湿热证的密切关系,诠释王氏连朴饮治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的合理性。2实验研究采集2019年11月至2020年9月在湖北省中医院光谷院区消化内镜中心就诊的患者4名,入选者须经13C-尿素呼气试验或14C-尿素呼气试验检查阳性;胃镜检查符合慢性胃炎表现;符合中医脾胃湿热证诊断标准。对采集的胃粘膜进行幽门螺杆菌的鉴定及培养。培养至对数期后,调整为浓度0.5*109的菌液,制备血平板。以纸片扩散法对六种抗生素和连朴饮加减方进行药敏实验,重复3次,记录平均直径。SPF级6周龄Balb/c小鼠90只,均为雄性,随机分为5组:生理盐水组（SL组）、病理模型组（BL组）、连朴饮加减方组（ZY组）、抗生素四联治疗组（XY组）、联合治疗组（ZX组）。适应性饲养6天后,除生理盐水组（SL组）外,每组小鼠以5×109CFU/ml克拉霉素耐药菌液0.2ml隔日灌胃2次,共19天。每间隔2天记录一次体重。最后一次灌胃结束后,常规饲养3天,每组随机选取两只小鼠检测,以胃组织尿素酶实验阳性和胃粘膜Warthin-Starry银染色幽门螺杆菌定植为造模成功的标志。造模成功后,各组干预14天,生理盐水组（SL组）和病理模型组（BL组）以生理盐水0.3ml/天灌胃;连朴饮加减方组（ZY组）以0.5g/ml连朴饮加减方0.3ml/天灌胃;抗生素四联治疗组（XY组）以四联药物（阿莫西林、左氧氟沙星、埃索美拉唑、枸橼酸铋钾）的生理盐水溶液0.3ml/天灌胃;联合治疗组（ZX组）以含抗生素四联药物的连朴饮加减方溶液0.3ml/天灌胃。给药干预结束后3天,处死各组小鼠,测量小肠段长度;固定胃组织行Warthin-Starry银染色;眶窦取血分离血清以Elisa法检测IL-6、TNF-α浓度。取下完整胆囊,以液氮速冻后-80℃冻存,以液相色谱质谱联用技术对胆囊胆汁酸进行定量。取盲肠内容物,以16S r RNA测序技术检测肠道菌群。结果1幽门螺杆菌与王氏连朴饮的相关研究幽门螺杆菌菌体为螺旋形、单极鞭毛结构,具有高效的尿素分解能力,这些特性使其可以在胃粘膜上皮增殖。幽门螺杆菌对定植环境要求苛刻,其主要致病机理是免疫损伤,致癌效应与多次组织修复中出现基因复制错误有关。在胃粘膜微观辩证和患者整体症状上,幽门螺杆菌感染与中医脾胃湿热证本质研究具有高度的一致性,中医药在改善微环境,免疫调节上具有显着的优势,以王氏连朴饮治疗幽门螺杆菌相关性胃炎效果显着。在原方基础上,连朴饮加减方增加了抑菌和改善胃粘膜的药物,可以从病原微生物自身特征和宿主免疫反应两方面治疗幽门螺杆菌相关性胃炎。课题组前期研究表明连朴饮加减方在网络药理学上符合减轻炎症的潜在通路,能促进胃肠动力、提升胃泌素水平,具有治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的作用机制。2实验研究2.1基因检测显示本实验选取的幽门螺杆菌临床株对克拉霉素、呋喃唑酮耐药基因发生了突变。在纸片扩散法的药敏试验中,克拉霉素、四环素、甲硝唑、阿莫西林、呋喃唑酮、左氧氟沙星的抑菌圈直径分别为9mm、12mm、4mm、18mm、20mm、23mm,本实验选取的幽门螺杆菌临床株对克拉霉素、四环素、甲硝唑耐药。浓度为0.5g/ml的连朴饮加减方抑菌圈直径为17.78±1.64mm。2.2抗生素四联组（XY组）在胃小凹结构中可见圆球状幽门螺杆菌聚集;连朴饮加减方组（ZY组）黏液中散在少量杆状幽门螺杆菌。与生理盐水组（SL组）比较,病理模型组（BL组）小鼠血清IL-6、TNF-α浓度显着升高（P<0.05）。与病理模型组（BL组）比较,连朴饮加减方组（ZY组）小鼠血清TNF-α浓度显着降低（P<0.05）,抗生素四联治疗组（XY组）小鼠血清IL-6、TNF-α浓度显着降低（P<0.05）,连朴饮加减方联合四联治疗组（ZX组）小鼠血清IL-6、TNF-α浓度无统计学差异。结果提示,以克拉霉素耐药幽门螺杆菌灌胃造模导致小鼠血清IL-6、TNF-α浓度显着升高,连朴饮加减方干预14天可降低小鼠血清TNF-α浓度,减轻炎症。2.3在43种胆汁酸中,存在组间差异的13种胆汁酸为CUCA、αMCA、βMCA、λMCA、ωMCA、CA、ACA、7-keto DCA、TCDCA、TDCA、THDCA、TLCA、GUDCA。与生理盐水组（SL组）相比,抗生素四联治疗组（XY组）有TCDCA、TDCA、THDCA、TLCA、GUDCA共五种胆汁酸存在显着统计学差异,连朴饮加减方组（ZY组）仅THDCA一种胆汁酸存在显着统计学差异。2.4感染了克拉霉素耐药性幽门螺杆菌后,小鼠肠道菌群丰度显着下降（P<0.05）,连朴饮加减方组（ZY组）在菌种和含量上生理盐水组（SL组）相似度最高;抗生素四联治疗组（XY组）菌群丰度明显下降,且样本离散性最大;联合治疗组（ZX组）居于两者之间。结论1王氏连朴饮具有治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的作用机制。2在体外实验中,连朴饮加减方对克拉霉素耐药幽门螺杆菌有抑杀效应,与阿莫西林的抗菌效应接近。3在小鼠体内,连朴饮加减方对克拉霉素耐药幽门螺杆菌有较好的抑杀效果;与抗生素四联疗法相比,不出现球形变耐药现象。4与抗生素四联疗法相比,连朴饮加减方在维持胆汁酸生理稳态上具有优势。5与抗生素四联疗法相比,连朴饮加减方在维持肠道物种多样性多样性上具有优势。6连朴饮加减方对克拉霉素耐药幽门螺杆菌相关性胃炎疗效显着,与抗生素四联疗法相比,不出现球形变耐药现象;并在维持胆汁酸代谢稳态和维持肠道物种多样性上有显着优势。
杜秋颖[9]（2021）在《幽门螺杆菌感染对慢性胃炎患者胃内菌群影响的初步研究》文中认为目的:本文旨在研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）感染后,具有上消化道症状的慢性胃炎患者的胃黏膜菌群结构、多样性等是否会发生改变,并分析H.pylori感染后胃黏膜菌群变化与其慢性感染不能自我清除、胃粘膜慢性炎症活动的致炎机制等是否存在潜在关联。对H.pylori感染人体的致病机制研究及防治具有重要意义。方法:本研究共纳入从2020年6月至2020年11月期间具有上消化道症状的慢性胃炎患者26人,其中包括H.pylori阳性的慢性胃炎患者（12人）及H.pylori阴性（14人）的慢性胃炎患者。通过问卷调查及口头说明研究内容等方式,对符合入组标准并签署同意书的患者采用同位素标记的尿素13C呼气试验（Urea Breath Test,UBT）、快速尿素酶试验（Rapid Urease Test,RUT）、胃粘膜组织病理学染色检测,若患者UBT阳性和（或）RUT阳性及胃粘膜组织病理学染色可见H.pylori（即三条标准中符合包含胃粘膜组织病理学染色阳性在内的两条标准）,则判定患者存在H.pylori感染（H.pylori阳性）,根据H.pylori检测结果将26例患者分为H.pylori阳性的慢性胃炎组（Group＿HP＿Pos组）及H.pylori阴性的慢性胃炎组（Group＿HP＿Neg组）,并收集其胃黏膜样本,使用基于Illumina高通量测序技术的细菌16Sr RNA基因（16Sr RNA gene,16Sr RNA）测序方法,对H.pylori感染和不同炎症性程度的慢性胃炎患者胃内菌群结构、物种多样性等展开分析。结果:本研究采集H.pylori阳性的慢性胃炎患者及H.pylori阴性的慢性胃炎患者共26份样本。经16Sr RNA高通量测序后Group＿HP＿Pos组的有效序列平均为63830条,Group＿HP＿Neg组的有效序列平均为68151条,最终得到的运算分类单位（Operational Taxonomic Unit,OTUs）为11731条。经OTU分析,Group＿HP＿Neg组OTU量高于Group＿HP＿Pos组,两组的共有的OTU数量为5706个,分别占Group＿HP＿Neg组和Group＿HP＿Pos组总OTU数量的63.22%和67.83%,在很大程度上说明两组菌群结构具有相同之处,而高数量的OTU数也提示两者胃内菌群具有较高的丰富度。两组样本α多样性指数评估证实了本研究样本测序量及深度已覆盖胃内绝大多数细菌,且均有良好的物种丰富度和均匀度,但经α多样性指数分析后发现Group＿HP＿Pos组和Group＿HP＿Neg组两者间胃黏膜菌群α多样性未见明显差异。通过进一步分析胃粘膜菌群结构的Beta多样性,我们发现Group＿HP＿Pos组与Group＿HP＿Neg组的微生物群落结构相似,两者胃黏膜菌群β多样性无统计学差异。我们将所得的OTU注释到各分类水平,胃内微生物被划分为32个菌门,84个菌纲,207个菌目,399个菌科,973个菌属,454个菌种。Group＿HP＿Pos组与Group＿HP＿Neg组的优势菌门均为拟杆菌门、变形菌门、厚壁菌门、放线菌门、Epsilonbacteraeota。两组排名前五的菌属均为:毛螺旋菌属NK4A136组（Lachnospiraceae＿NK4A136＿group）、螺杆菌属（Helicobacter）、拟杆菌属（Bacteroides）、克雷伯氏菌属（Klebsiella）、假单胞菌属（Pseudomonas）。其中螺杆菌属在Group＿HP＿Pos组丰度明显高于Group＿HP＿Neg组,而明显减少的菌属为假单胞菌属。然后利用Wilcoxon差异统计分析得出Group＿HP＿Pos组与Group＿HP＿Neg组在门、纲、目、科、属、种分类水平上均存在显着差异的菌落。其中差异菌门分别是:Epsilonbacteraeota、梭杆菌门;差异物种丰度排名前十的菌属为:Helicobacter、Christensenellaceae＿R-7＿group、脱硫弧菌属（Desulfovibrio）、Cetobacterium、普雷沃菌属（Prevotella）、短芽孢杆菌（Brevibacillus）、原小单孢菌属（Promicromonospora）、假黄单胞菌属（Pseudoxanthomonas）、小杆菌属（Dialister）、小单孢菌属（Micromonospora）。我们利用属水平相关性热图对不同菌属之间相关性分析后发现菌属之间存在一定的正负相关性,其中下列菌属之间成正相关:Helicobacter与Rikenellaceae＿RC9＿gut group、拟杆菌属;Lachnospiraceae＿NK4A136＿group与罗氏菌属、Odoribacter、Prevotella＿1、鞘氨醇单胞菌属、Alistipes、Ruminococcus 1;假单胞菌属与肠杆菌属、Klebsiella;Bacteroides与Rikenellaceae＿RC9＿gut group;Klebsiella与Enterobacter、Parasutterella、柠檬酸杆菌属;而下列菌属之间成负相关:Helicobacter与Ruminococcaceae＿UCG-014;Pseudomonas与粪杆菌属;Klebsiella与Alistipes、瘤胃梭菌属9、拟普雷沃菌属。最后我们利用PICRUSt软件对基于16S的KEGG功能预测,在KEGG＿L1水平上两组未见明显差异;在KEGG＿L2水平上的代谢通路中,Group＿HP＿Pos组和Group＿HP＿Neg组在循环系统上有显着差异,且Group＿HP＿Pos组的癌症、神经退行性疾病、免疫系统、信号分子相互作用、复制和修复、循环系统、细胞运动、心血管疾病、细胞生长与凋亡、翻译、内分泌系统、环境适应代谢通路呈升高趋势。在KEGG＿L3水平上Group＿HP＿Pos组和Group＿HP＿Neg组在内分泌及其他因素调节的钙再吸收、唾液分泌、胃酸分泌、醛固酮调节钠重吸收、阿米巴病、帕金森病、心肌收缩7个方面功能具有显着差异。而在组间比较KO值过程中我们发现Group＿HP＿Pos组样本在下列代谢功能方面较Group＿HP＿Neg组样本具有更高表达:描述不良特征、用于一般功能预测;氨基酸代谢、外源生物降解与代谢、多环芳烃降解;环境信息处理,膜运输,运输工具。结论:慢性胃炎患者感染H.pylori后会发生胃内菌群紊乱,一些致病的口腔菌群及肠道菌群增加,还存在一些与H.pylori呈正负相关关系的菌群,这为下一步使用益生菌辅助治疗H.pylori感染的方法提供了新的研究方向。
宋聪华[10]（2021）在《幽门螺杆菌与Correa’s Cascade关系及ERM家族在其中的机制探究》文中研究指明背景和目的:癌症已成为严重威胁我国居民健康的重大公共卫生问题。《健康中国行动—癌症防治实施方案（2019—2022年）》中提出了“控制危险因素”、“癌症信息化大数据应用”、“提升癌症防治能力”、“推广癌症早诊早治”等核心行动内容。我国为消化系统肿瘤高发区,其中胃癌是癌症防控工作的要点。然而,胃癌确诊时就多已伴肿瘤局部浸润和远处转移,死亡率高。因此,如何防控胃癌具有重要意义。与多种肿瘤的发生过程类似,胃黏膜病灶在发生癌变之前一般也会有个慢性的炎症过程,即“炎—癌转化”这个科学问题。“Correa’s Cascade”假说认为肠型胃癌（Lauren分型）的发生一般遵循以下演变规律:正常胃黏膜→慢性非萎缩性胃炎（CNAG）→慢性萎缩性胃炎（CAG）→胃黏膜肠上皮化生（IM）→胃黏膜不典型增生（DYS）→胃黏膜癌变（ML）,表明胃癌的发生是一个多阶段的慢性演变过程,为胃癌的防控提供了依据。由于炎症“可控”,而癌症“难控”,故围绕“Correa’s Cascade”假说相关胃黏膜病变的早期管理成了胃癌防控的着力点。在我国,不仅胃癌的发病率高,幽门螺杆菌（H.pylori）的感染率也高。H.pylori感染是包括胃癌在内等诸多上消化道疾病的主要病因,被认为是“Correa’s Cascade”假说相关胃黏膜病变的“始作俑者”。因此,根除H.pylori是“Correa’s Cascade”假说相关胃黏膜病变管理的重要落脚点,是炎症“可控”的具体体现,更是提升胃癌防治能力的理论依据。值得指出的是,“Correa’s Cascade”假说描述的相关胃黏膜病变阶段“逐级交联”及“时序演变”的进展规律是学者通过观察胃癌高危人群队列胃黏膜病变随时间进展的病理学改变而对胃癌发生模式所作出的一种科学假设,属于质性研究。鉴于“Correa’s Cascade”假说中各胃粘膜病变之间的进展需要较漫长的时间,因此研究这一模式存在困难,从而一定程度上限制了该模式的前瞻性研究。因此,“Correa’s Cascade”假说的科学性还需要更多的真实世界数据支持。此外,“Correa’s Cascade”假说中各胃黏膜病变致胃癌风险大小也不甚清楚,H.pylori触发“Correa’s Cascade”假说相关胃黏膜病变发生和进展的作用靶点及分子事件目前仍知之甚少。ERM家族（ezrin/radixin/moesin,ERM family）是细胞质膜与细胞骨架之间的重要连接蛋白,也是细胞微绒毛主要组成部分,包括以下四个成员:埃兹蛋白（ezrin）、根蛋白（radixin）、膜突蛋白（moesin）、膜突样蛋白（merlin）。它们通过影响细胞骨架参与对细胞膜结构与细胞形态的调控,对维持细胞形变和细胞运动有着重要作用,并作为细胞皮质信号整合子,通过沟通膜蛋白介导信号传递参与细胞极化、侵袭、迁移和黏附等过程。近年来,研究发现部分ERM家族蛋白成员不仅与多种病原微生物感染致病密切相关,而且在消化系统肿瘤发生进展中也扮演着重要角色。因此,有必要对ERM家族蛋白在H.pylori致“Correa’s Cascade”假说相关胃黏膜病变“炎—癌转化”这一过程中所扮演的角色进行探讨,以期为胃癌防控及胃癌发生进展分子机制等研究提供参考。方法:1.H.pylori与Correa’s Cascade 的关系（1）横断面调查研究设计,提取2015年1月1日至2019年12月31日连续5年调查区间中所有因各种原因于南昌大学第一附属医院消化内镜中心接受胃镜检查者的个人特征、临床信息、胃镜记录及病理描述等资料。（2）根据筛选标准对数据进行清洗整理,基于胃镜活检病理检测信息计算Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变总检出率,计算Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变在不同年龄段中的检出率;（3）将近5年来Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变在任意一个受检者中被同时检出情况制作成共现（两两比共同出现）分布表,并计算胃黏膜病变的共现率,分析Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变“逐级交联”及“时序演变”的规律;（4）基于胃镜活检病理检测信息计算H.pylori阳性率,分析H.pylori阳性率在Correa’s Cascade相关胃黏膜病变中的差异,探讨H.pylori感染程度与Correa’s Cascade相关胃黏膜病变程度的关联;（5）基于连续5年胃镜数据分析H.pylori阳性率与Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变检出率的演变趋势。2.ERM家族在Correa’s Cascade中的机制初探（1）从GEO数据库获取Correa’s Cascade相关胃黏膜病变基因表达谱信息数据（GSE106656和GSE11631）,利用官网GEO2R分析ERM家族在不同胃黏膜病变中的表达差异（2）从TCGA获取胃癌转录组数据和临床信息,利用及相关程序包（edgR和DESeq2）对ERM家族在胃癌与癌旁中的表达差异进行分析,（3）在Oncomine数据库中分析ERM家族在不同胃癌肿瘤分型（Lauren分型:肠型胃癌、弥漫型胃癌及混合型胃癌3种）、不同性别（男、女）以及不同肿瘤分期阶段（Stage Ⅰ～Ⅳ期）中的差异。（4）利用GEPIA分析了 ERM蛋白家族基因在胃癌组织、癌旁组织及正常胃组织中的表达差异,并分析了 ERM蛋白家族基因表达水平与胃癌预后关系。（5）利用Kaplan-Meier plotter对ERM蛋白家族基因表达水平与胃癌预后关系作了补充分析和验证。（6）基于Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变中ERM蛋白家族基因的表达差异分析结果运用R语言进一步实现基因功能富集分析（GSEA）。（7）基于“炎—癌转化”科学问题,结合H.pylori致病分子机制、ERM蛋白家族分子生物学特点及基因功能富集结果,进一步通过TIMER数据库进行了免疫浸润分析。3.ERM家族蛋白moesin在胃黏膜病变中的表达及意义（1）选择 26695、ATCC43504（即 NCTC11637）、7.13、PMSS1、G27 及 CCS9803等作为H.pylori标准菌株或模式菌株（cagA PMSSl>cagA 7.13）,另选择永生化的人胚胃黏膜上皮细胞（GES-1）,以及人胃腺癌细胞HGC-27与BGC-823、低度分化的人胃腺癌细胞AGS与SUN-1以及中度分化的人胃腺癌细胞SGC-7901作为实验细胞。（2）Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变选择病理科保存的组织蜡块,病变分别为CNAG（含轻度与重度,即 MCNAG与SCNAG）、CAG、IM、DYS以及ML,均含有H.pylori感染信息。（3）选择12例胃癌手术患者的胃癌组织及相应的癌旁组织作为验证补充。（4）qRT-PCR实验检测各实验细胞中moesin mRNA表达（5）Western blot法检测各细胞系与H.pylori培养后moesin表达水平的变化。（6）Western blot法和免疫组织化学染色法检测胃癌与癌旁组织中moesin蛋白的表达。（7）免疫组织化学染色法检测合并H.pylori感染Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变样本中moesin蛋白的表达。结果:1.H.pylori与Correa’s Cascade 的关系（1）在2015年至2019年这连续5年的调查区间中,因各种原因于南昌大学第一附属医院消化内镜中心接受胃镜检查者资料经初筛共有399059例次。结合既定的筛选标准,对399059例次受检者资料经R语言数据清洗进一步剔除了 87029例次。最终,本次调查研究共获得符合筛选标准的胃镜受检者资料共312030例。按年份划分,2015年至2019年的胃镜检查例数分别为58172例、61292例、65661例、63027例、63878例。（2）经数据筛选结果发现312030例受检者资料中行胃镜黏膜活检病理检查共171974例,胃镜检查过程中对受检者的总活检率约为55.1%（171974/312030）。若按年份划分,2015年至2019年的胃镜活检例数分别为20387例、29136例、38556例、41406例、42489例,对应的活检率分别为35%、48%、59%、66%、67%。（3）在171974例行胃黏膜活检病理检查的受检者中,年龄最小者不足10岁,年龄最大者达96岁,总体平均年龄为（50.9±12.9）岁。胃黏膜活检病理检查结果表明可同时存在着两种及以上的“Correa’s Cascade”假说相关胃黏膜病变,各相关胃黏膜病变并非各自独立,部分可以存在“交叉”、“重叠”或“共现”情况。（4）Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变在各年龄段中的检出率存在一定的趋势。具体而言,CNAG普遍在各年龄段中检出,以青少年组人群为主,随着年龄的增加其检出率呈下降趋势。CAG+（即,CAG+IM）、DYS、ML则与之相反,即随着年龄的增加其检出率呈上升趋势。这些胃黏膜病变随着年龄的变化趋势与Correa’s Cascade假说所描述的相关胃黏膜病变序列高度一致。（5）在不同胃黏膜病变中,各胃黏膜病变之间联系紧密程度并非完全一致,病变之间并非并列而是可能存在先后顺序且病变有优先发展方向,CNAG、CAG+、DYS、ML的发展趋势是逐级关联进展的,即病变有先后顺序（逐级）,现有病变优先向某一胃黏膜病变发展（交联）,且在病理生理（无外界干预）情况下,这种发展方向不可逆。（6）CNAG合并ML的概率为0.8%,CAG+合并ML的概率为1.1%,DYS合并ML的概率为11.0%。（7）在171977例胃镜黏膜活检及病理检查中行特殊染色查H.pylori感染状态共122735例,检测率高达71.4%（122735/171977）,提现了临床对H.pylori感染的认知和重视。近5年来,H.pylori的总体阳性率为31.0%。（8）Correa’s Cascade相关胃黏膜病变组中H.pylori感染阳性率均高于无Correa’s Cascade相关胃黏膜病变组（P均<0.01）,各Correa’s Cascade相关胃黏膜病变程度占比随着H.pylori感染程度分级或分度的增加而增加,Correa’s Cascade相关胃黏膜病变组中H.pylori感染阳性率均高于无Correa’s Cascade相关胃黏膜病变组（P均<0.01）,提示胃黏膜病变程度与H.pylori感染程度有关。进一步分析显示,除了 DYS病变,其他Correa’s Cascade相关胃黏膜病变程度差异均与H.pylori感染状态程度（分级与分度）关系,差异有统计学意义（P均<0.01）。（9）H.pylori感染与Correa’s Cascade相关各胃黏膜病变及病变程度之间的均有关联,各Correa’s Cascade相关胃黏膜病变程度占比随着H.pylori感染程度分级或分度的增加而增加,且近5年变化趋势基本一致。总体上,H.pylori阳性率、DYS及ML演变趋势一致,均呈逐年下降趋势。近3年来（2017～2019）Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变检出率的趋势变化均呈放缓趋势。2.ERM家族在Correa’s Cascade中的机制初探（1）在GEO数据分析中,发现ERM蛋白家族基因4个成员在CNAG vs CAG和CNAG vs IM中均无差异,而在CNAG vs ML和CAG vs ML中发现只有moesin基因表达均为上调,差异有统计学意义（P均<0.05）。（2）在TCGA-STAD数据分析中,发现ERM蛋白家族基因中只有moesin基因表达有差异,其在癌组织中的表达水平高于胃癌旁组织,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）在GEPIA中将TCGA-STAD和GTEx数据进行联合分析,发现ERM蛋白家族中只有moesin基因和merlin基因表达有差异,二者在癌组织中的表达水平均高于胃癌旁组织以及胃正常组织,差异有统计学意义（P均<0.05）。（4）在不同临床分期中,发现ERM蛋白家族基因中只有moesin基因在各期中的表达差异有统计学意义（P<0.05）,且Ⅱ～Ⅲ期表达水平显着高于Ⅰ期。（5）不同胃癌类型（Lauren分型）中,发现ERM蛋白家族基因中moesin基因和merlin基因表达有差异且稳定,表达水平均高于癌旁组织（P均<0.05）。（6）高表达的moesin基因预示着胃癌总体预后（OS与DFS）均不良（P<0.05）,而merlin基因表达水平与胃癌预后未见相关性。（7）Moesin基因的表达水平与胃癌患者的肿瘤分级及T分期有关（P均<0.05）,而与性别、年龄、N/M分期均无关。（8）Moesin基因在胃癌组织中的表达水平不仅较癌旁组高,也较正常胃组织高（P均<0.05）。此外,其在合并H.pylori感染的胃癌组织中的表达水平也较无H.pylori感染的胃癌组织高（P均<0.05）。（9）基因富集分析显示胃癌中moesin基因主要与细胞因子与细胞因子受体相互作用途径、Janus激酶—信号转导因子与转录激活因子（JAK-STAT）途径、细胞粘附分子途径、钙离子信号通路途径、Toll样受体信号通路以及细胞外基质受体相互作用途径等有关（P均<0.001）。（10）胃癌中moesin基因与JAK1、STAT5、ZEB1、ZEB2的有着较密切的相关性,与NF-κB、IL-6呈正相关性（P均<0.05）。（11）在TIMER分析中,发现除B细胞外,胃癌组织中moesin基因与多数免疫细胞均有正相关性（P均<0.05）,相关性系数由大到小依次为树突状细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、T细胞。3.ERM家族蛋白moesin在胃黏膜病变中的表达及意义（1）不同H.pylori菌株作用GES-1细胞的moesin蛋白表达均显着高于无H.pylori作用的对照组（P<0.01）。（2）与不加H.pylori的GES-1/AGS 对照组相比,GES-1/AGS+PMSS1、GES-1/AGS+7.13组的moesin蛋白表达均增高,两两之间差异比较有统计学意义（P<0.01）。而且,GES-1/AGS+PMSS1组moesin蛋白的表达显着高于GES-1/AGS+7.13组,二者差异有统计学意义（P<0.05）,表明moesin蛋白的表达可能部分是通过菌株的cagA来实现的（已知cagA拷贝数:PMSS1>7.13）（3）与 GES-1/AGS 对照组相比,GES-1/AGS+WT7.13 组、GES-1/AGS+△cagA7.13组的moesin蛋白表达均增高,两两之间差异有统计学意义（P<0.01）。而且,GES-1/AGS+△cagA7.13组moesin蛋白的表达显着低于GES-1/AGS+WT7.13组,两者之间差异有统计学意义（P均<0.05）,进一步证实H.pylori上调moesin蛋白的表达可能主要是通过CagA来实现的。（4）利用Western blot方法检测12对临床胃癌及配对组织样本中moesin蛋白的表达情况,结果显示83.3%（10/12）的moesin蛋白在胃癌组织中的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义（P<0.01）,利用免疫组织化学染色法检测也显示moesin蛋白在胃癌组织中的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义（P<0.01）。（5）利用免疫组织化学染色法检测moesin蛋白在Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变中的表达,结果显示,无论是在炎细胞还是腺细胞中,moesin蛋白在Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变中的表达差异有统计学意义（P<0.01）;在腺细胞中,moesin蛋白表达在ML组显着高于其他各组（P<0.01）,而其他组之间无统计学差异（P>0.05）;在炎细胞中,则moesin蛋白表达在SCNAG组显着高于其他胃黏膜病变组（P<0.01）,而其他组各组之间无统计学差异（P>0.05）。（6）利用免疫组织化学染色法检测moesin蛋白在合并H.pylori感染Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变中的表达,结果显示,无论是在炎细胞还是腺细胞中,moesin蛋白在Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变中的表达差异有统计学意义（P<0.01）,尤其是在腺细胞中,无论有无H.pylori感染,ML组的表达均高于其他胃黏膜病变组（P均<0.001）;无论是在炎细胞还是腺细胞中,moesin蛋白在合并H.pylori感染Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变中的表达均显着高于相对应的无H.pylori感染Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变,以腺细胞明显（P<0.05）。结论:1.“Correa’s Cascade”假说中胃黏膜病变逐级交联及时序演变的进展规律与真实世界证据相吻合,假说中不同阶段的胃黏膜病变合并癌变的风险大小不一,对胃癌防控有着确切的指导价值。2.H.pylori感染与“Correa’s Cascade”假说相关胃黏膜病变有关,二者变化趋势基本一致,故在“Correa’s Cascade”假说指导下控制H.pylori感染对预防胃癌具有积极意义。3.ERM家族蛋白moesin在“Correa’s Cascade”假说相关胃黏膜病变中高表达,尤其是在胃黏膜癌变阶段,且与H.pylori及其毒力因子CagA有关。4.高表达的moesin与胃癌进展有关,能预示胃癌的不良预后,故异常高表达的moesin可能发挥着促癌作用,有望作为胃癌的诊断生物标志物或治疗干预靶点。
二、幽门螺杆菌感染与胃癌发生发展的关系（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、幽门螺杆菌感染与胃癌发生发展的关系（论文提纲范文）
（1）血清IL-8表达水平和IL-8-251A/T基因多态性及幽门螺杆菌感染与胃癌发生的相关性（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 临床资料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 幽门螺杆菌感染标准 |
| 1.2.2 胃液IL-8水平检测 |
| 1.2.3 IL-8-251A/T多态性检测 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组受试者胃液中IL-8水平比较 |
| 2.2 两组受试者幽门螺杆菌感染与IL-8-251A/T分布情况 |
| 2.3 不同IL-8-251A/T基因型患者胃液中IL-8表达情况 |
| 3 讨论 |
（2）幽门螺杆菌感染胃癌患者外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体的表达及其临床意义（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 主要试剂 |
| 1.2.2 胱天蛋白酶-1、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白m RNA表达测定 |
| 1.2.3 IL-1β、IL-18和幽门螺杆菌感染量的测定 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 三组研究对象一般资料比较 |
| 2.2 三组研究对象NLRP3、ASC、caspase-1 m RNA及IL-1β、IL-18表达水平比较 |
| 2.3 研究组患者NLRP3、ASC、caspase-1 m RNA 及IL-1β、IL-18表达水平与幽门螺杆菌感染量的相关性分析 |
| 2.4 NLRP3、ASC、caspase-1 m RNA表达水平对胃癌的诊断价值 |
| 2.5 研究组患者5年生存率统计 |
| 3 讨论 |
（3）幽门螺杆菌及其细胞毒素相关蛋白A与胃癌形成的关系分析（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 观察指标 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组患者幽门螺杆菌检测结果对比 |
| 2.2 两组患者幽门螺杆菌抗体细胞毒素相关蛋白A检测结果对比 |
| 2.3 汉族、维族幽门螺杆菌感染情况及细胞毒素相关蛋白A对比 |
| 2.4 两组患者根除幽门螺杆菌治疗有效率对比 |
| 2.5 幽门螺杆菌及其细胞毒素相关蛋白A和胃癌形成的相关性 |
| 3 讨论 |
（4）儿童幽门螺杆菌感染对全血锌、铁、钙、铜变化及对缺铁性贫血发生关系探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一章 研究资料与方法 |
| 1.研究资料 |
| 2.主要试剂 |
| 3.主要仪器和设备 |
| 4.标本采集 |
| 5.试验方法及步骤 |
| 6.统计学方法 |
| 第二章 结果 |
| 1.一般临床资料对比情况 |
| 2.Hp感染与全血锌、铁、钙、铜之间的关系 |
| 3.Hp感染与缺铁性贫血之间的关系 |
| 第三章 讨论 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 儿童幽门螺杆菌感染研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
（5）基于扶正祛邪理论的中医药治疗幽门螺杆菌感染相关疾病的证治规律研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 文献研究 |
| 第一章 基于证据图的中医药抗Hp感染的研究现状分析 |
| 1.资料与方法 |
| 1.1 文献检索 |
| 1.2 文献纳排标准 |
| 1.3 文献筛选与资料提取 |
| 1.4 数据分析与形式 |
| 2.结果 |
| 2.1 文献筛选流程及结果 |
| 2.2 相关研究文章发表年度趋势 |
| 2.3 临床研究类型及规模 |
| 2.4 中医证候及体质研究 |
| 2.5 中医药抗Hp方式研究 |
| 2.6 中医药抗Hp方案临床评价 |
| 2.7 中医药防治方案干预时机及适用情况 |
| 2.8 系统评价方法学质量及临床证据评价 |
| 2.9 临床指南与路径研究 |
| 3.讨论 |
| 3.1 中医药抗Hp应用现状及问题 |
| 3.2 中医药防治Hp感染未来的研究方向 |
| 3.3 本研究的不足 |
| 第二章 中医药抗Hp感染机理机制探讨 |
| 1.现代医学对Hp的认识及治疗 |
| 1.1 Hp的特性和致病特点 |
| 1.2 Hp的治疗 |
| 2.中医对Hp感染相关疾病的认识和治疗 |
| 2.1 中医对Hp感染的认识 |
| 2.2 中医对Hp相关疾病的治疗 |
| 2.3 扶正祛邪抗Hp感染的实践及机理机制探讨 |
| 3.讨论 |
| 第三章 中药扶正祛邪治疗Hp感染相关疾病的系统评价再评价 |
| 1.资料与方法 |
| 1.1 纳入与排除标准 |
| 1.2 文献检索 |
| 1.3 文献筛选与数据提取 |
| 1.4 质量评价 |
| 2.结果 |
| 2.1 文献筛选流程及结果 |
| 2.2 纳入研究的基本特征 |
| 2.3 纳入研究方法学质量评价结果 |
| 2.4 主要结局指标和证据质量分级 |
| 3.讨论 |
| 临床验证 |
| 第一章 基于古今医案云平台的中医药治疗Hp相关疾病的用药规律研究 |
| 1.研究资料 |
| 1.1 数据来源 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 2.研究方法 |
| 2.1 数据录入 |
| 2.2 数据规范 |
| 2.3 数据统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 医案检索结果及特点 |
| 3.2 中医证型分布情况 |
| 3.3 常用方剂使用情况 |
| 3.4 常用中药使用情况 |
| 4.讨论 |
| 第二章 基于扶正祛邪理论的中医药治疗Hp相关疾病的回顾性队列研究 |
| 1.对象与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 纳排标准 |
| 1.3 数据收集及整理 |
| 1.4 分组方法 |
| 1.5 结局评价 |
| 2.统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 病例基本情况 |
| 3.2 治疗结局 |
| 4.讨论 |
| 结语 |
| 1.本研究的主要结论 |
| 2.本研究的特色与创新 |
| 3.本研究的不足 |
| 4.展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间取得的科研与学术成果 |
| 个人简介 |
（6）血脂水平与胃息肉的相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 概述 |
| 第2章 资料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.1.1 患者来源 |
| 2.1.2 纳入标准 |
| 2.1.3 排除标准 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 收集指标 |
| 2.2.2 诊断及分组标准 |
| 2.2.3 统计方法 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 胃息肉与对照组的一般情况比较 |
| 3.2 胃息肉与对照组的BMI比较 |
| 3.3 胃息肉与对照组的高脂血症比较 |
| 3.4 胃息肉组和对照组各血脂成分之间比较: |
| 3.5 胃息肉组中不同病理类型血脂比较: |
| 3.6 胃息肉组中不同部位的息肉间血脂比较: |
| 3.7 血脂与胃息肉相关性分析 |
| 3.8 胃息肉患者血脂水平异常一般影响因素分析 |
| 3.9 无幽门螺杆菌感染条件下,胃息肉与对照组的高脂血症比较 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 第6章 不足与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 胃息肉发生危险因素的研究进展 |
| 参考文献 |
（7）致瘤微生物HPV和H.pylori调控mTOR信号通路介导恶性转化的机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 第一部分 HPV-16 E7上调miR-106a靶向LKB1激活mTOR信号通路调控宫颈鳞癌细胞的异常增殖与自噬 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 补充附图 |
| 第一部分小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 H.pylori通过NF-κB上调MYADM激活mTOR信号通路介导胃恶性转化 |
| 前目 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第二部分小结 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 致谢 |
| 博士期间发表论文 |
| 英文论文1 |
| 英文论文2 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| Western blot原始数据 |
（8）连朴饮加减方治疗克拉霉素耐药幽门螺杆菌相关性胃炎的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 Hp与王氏连朴饮的相关研究 |
| 1 Hp的流行病学特征 |
| 2 Hp的微生物学特征 |
| 2.1 Hp的形态学特征 |
| 2.2 Hp的菌体动力特征 |
| 2.3 Hp的生化特性 |
| 2.4 Hp的分布特征 |
| 3 Hp的致病机制研究 |
| 3.1 Hp的免疫损害 |
| 3.2 Hp的毒力因子 |
| 4 Hp的致病机理学说 |
| 4.1 漏屋顶(leking roof)假说 |
| 4.2 胃泌素(gastrin-link)假说 |
| 5 Hp与脾胃湿热证关系密切 |
| 6 Hp与王氏连朴饮的相关研究 |
| 6.1 连朴饮的方证研究 |
| 6.2 连朴饮加减方药味研究 |
| 6.3 连朴饮加减方前期研究基础 |
| 第二部分 连朴饮加减方对克拉霉素耐药幽门螺杆菌的体外抑菌作用研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 连朴饮加减方的组成与制备 |
| 2.2 实验仪器和设备 |
| 2.3 实验试剂 |
| 2.4 患者筛选 |
| 2.5 微生物实验耗材制备 |
| 2.6 克拉霉素耐药Hp的制备 |
| 2.7 耐药性幽门螺杆菌的冻存与复苏 |
| 3 结果 |
| 3.1 临床幽门螺杆菌培养结果 |
| 3.2 六种抗生素药敏结果 |
| 3.3 连朴饮加减方药敏结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 胃粘膜的选择 |
| 4.2 Hp的分离 |
| 4.3 Hp的鉴定 |
| 4.4 培养基的选择 |
| 4.5 培养环境的选择 |
| 4.6 用于筛选的抗生素 |
| 4.7 菌株的冻融与复苏 |
| 4.8 菌株的筛选 |
| 第三部分 连朴饮加减方对克拉霉素耐药HAG小鼠胃炎疗效的研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验仪器和设备 |
| 2.3 实验试剂 |
| 2.4 造模克拉霉素耐药幽门螺杆菌菌液的制备 |
| 2.5 干预药物的制备 |
| 2.6 动物模型建立 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 小鼠一般情况 |
| 3.2 小鼠小肠长度对比 |
| 3.3 胃粘膜W-S银染色对比 |
| 3.4 血清IL-6、TNF-α浓度对比 |
| 4 讨论 |
| 4.1 造模方式 |
| 4.2 药物浓度的调整 |
| 4.3 Hp球形变解读 |
| 4.4 胃粘膜Warthin-Starry银染色结果 |
| 4.5 各组血清TNF-α、IL-6 浓度的解读 |
| 4.6 中药与抗生素联合治疗的思考 |
| 第四部分 连朴饮加减方对克拉霉素耐药性HAG小鼠胆汁酸代谢的研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 药品与试剂 |
| 2.2 仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 数据分析与处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 总体胆汁酸差异对比 |
| 3.2 组间含量有统计学差异胆汁酸 |
| 4 讨论 |
| 4.1 胆汁酸的生理功能 |
| 4.2 胆汁酸与Hp的相关研究 |
| 4.3 Hp与“肝”的证素研究 |
| 第五部分 连朴饮加减方对克拉霉素耐药性HAG小鼠肠道菌群的研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 药品与试剂 |
| 2.2 仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 数据处理过程和参数 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 肠道菌群多样性分析 |
| 3.2 门水平物种组成结构分析 |
| 3.3 组间属水平差异分析 |
| 3.4 LEfSe多级物种差异判别分析 |
| 3.5 Net Work分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 Hp与肠道菌群 |
| 4.2 Hp的不同治疗方式对肠道菌群的影响 |
| 全文讨论 |
| 1 连朴饮加减方疗效的综合评判 |
| 2 问题与展望 |
| 3 创新点 |
| 3.1 沟通临床和科研的造模方式 |
| 3.2 多组学分析全面反映中药的整体调节效应 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录一:综述 幽门螺杆菌相关性胃炎的中西医研究进展与面临的问题 |
| 参考文献 |
| 附录二 胆汁酸质谱MRM采集参数表 |
| 附录三 攻读博士学位期间取得的成果 |
| 致谢 |
（9）幽门螺杆菌感染对慢性胃炎患者胃内菌群影响的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要设备和仪器 |
| 1.2 临床调查及病例采集 |
| 1.3 研究对象 |
| 1.4 病例选择标准 |
| 1.5 病例分组 |
| 1.6 诊断标准 |
| 1.7 胃黏膜样本菌群测序 |
| 2 结果 |
| 2.1 患者统计学特征 |
| 2.2 微生物群落基因组DNA分离、提取以及验证 |
| 2.3 测序结果质控分析 |
| 2.4 OTU分类与注释 |
| 2.5 群落结构分布 |
| 2.6 Alpha多样性分析 |
| 2.7 Beta多样性分析 |
| 2.8 微生物多元变量统计分析 |
| 2.9 关联与模型预测分析 |
| 2.10 进化分析 |
| 2.11 PICRUSt分析 |
| 3 讨论 |
| 4 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 幽门螺杆菌感染对胃内菌群影响的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
（10）幽门螺杆菌与Correa’s Cascade关系及ERM家族在其中的机制探究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 胃癌的防控具有重要意义 |
| 1.2 "Correa’s Cascade"假说指导着胃癌的防控 |
| 1.3 幽门螺杆菌是"Correa’s Cascade"假说相关胃黏膜病变的病因 |
| 1.4 ERM家族蛋白或在H.pylori感染相关胃黏膜病变中发挥作用 |
| 1.5 研究设计与意义 |
| 第2章 H.pylori与 Correa's Cascade的关系 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 筛选标准 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 研究设计 |
| 2.2.2 研究实施 |
| 2.2.3 研究变量 |
| 2.2.4 相关标准(定义、操作规范、诊断标准、数据测量及分类依据) |
| 2.2.5 研究偏倚 |
| 2.2.6 样本量估计 |
| 2.2.7 数据处理与统计学方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 胃镜活检概况 |
| 2.3.2 受检者病理信息概况 |
| 2.3.3 Correa's Cascade假说相关胃黏膜病变总检出率 |
| 2.3.4 Correa's Cascade假说相关胃黏膜病变与年龄的关系 |
| 2.3.5 Correa's Cascade假说相关胃黏膜病变级联与序列的科学性 |
| 2.3.6 H.pylori感染状态 |
| 2.3.7 H.pylori感染与Correa's Cascade相关胃黏膜病变关系 |
| 2.3.8 H.pylori感染程度与Correa's Cascade相关胃黏膜病变程度关系 |
| 2.3.9 H.pylori感染与Correa's Cascade假说相关胃黏膜病变的演变关系 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 ERM家族在Correa's Cascade中的机制初探 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 研究对象 |
| 3.1.2 材料来源 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 数据获取 |
| 3.2.2 差异分析 |
| 3.2.3 预后分析 |
| 3.2.4 基因功能 |
| 3.2.5 免疫浸润分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 ERM家族基因在Correa's Cascade假说相关胃黏膜病变中的表达 |
| 3.3.2 ERM家族基因在胃癌组织中的表达 |
| 3.3.3 ERM家族基因在不同胃癌分期中的表达 |
| 3.3.4 ERM家族基因在不同胃癌类型(Lauren分型)中的表达 |
| 3.3.5 MSN与NF2 的表达水平对胃癌患者预后的影响 |
| 3.3.6 MSN表达水平与胃癌患者临床病理参数的关系 |
| 3.3.7 MSN在合并H.pylori感染胃癌组织中的表达 |
| 3.3.8 基于MSN表达的胃癌转录组GSEA分析 |
| 3.3.9 MSN相关免疫浸润概况 |
| 3.4 讨论 |
| 第4章 ERM家族蛋白moesin在胃黏膜病变中的表达及意义 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 模式菌株 |
| 4.1.2 实验细胞 |
| 4.1.3 蜡块组织 |
| 4.1.4 新鲜组织 |
| 4.1.5 主要试剂 |
| 4.1.6 主要仪器 |
| 4.1.7 溶液配制 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 细胞的复苏、培养、传代、计数及冻存 |
| 4.2.2 H.pylori的复苏、鉴定、传代及保存 |
| 4.2.3 H.pylori与各细胞系共培养 |
| 4.2.4 qRT-PCR实验检测各细胞系moesin mRNA表达 |
| 4.2.5 Western blot法检测各细胞系和新鲜组织moesin蛋白的表达 |
| 4.2.6 免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色法检测胃黏膜组织样本中moesin蛋白的表达 |
| 4.2.7 统计学方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 不同细胞中moesin m RNA的表达 |
| 4.3.2 菌株刺激细胞的适宜浓度与时间 |
| 4.3.3 不同菌株刺激后胃上皮细胞moesin蛋白的表达 |
| 4.3.4 H.pylori及 CagA对胃上皮细胞和胃癌细胞moesin表达的调控 |
| 4.3.5 Moesin蛋白在胃癌组织中的表达 |
| 4.3.6 Moesin蛋白在Correa’s Cascade假说相关胃黏膜病变中的表达 |
| 4.3.7 Moesin蛋白在合并H.pylori感染胃黏膜病变中的表达 |
| 4.4 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 胃黏膜癌前变化与胃癌预防研究现状 |
| 参考文献 |
四、幽门螺杆菌感染与胃癌发生发展的关系（论文参考文献）
- [1]血清IL-8表达水平和IL-8-251A/T基因多态性及幽门螺杆菌感染与胃癌发生的相关性[J]. 于雅丽,李振华,牛学恩,李宾. 热带医学杂志, 2021(12)
- [2]幽门螺杆菌感染胃癌患者外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体的表达及其临床意义[J]. 叶立功,许佩. 中国医学前沿杂志(电子版), 2021(11)
- [3]幽门螺杆菌及其细胞毒素相关蛋白A与胃癌形成的关系分析[J]. 朱健康,帕力达·帕拉哈提,王义霞. 世界复合医学, 2021(08)
- [4]儿童幽门螺杆菌感染对全血锌、铁、钙、铜变化及对缺铁性贫血发生关系探讨[D]. 赵张颖. 延安大学, 2021(11)
- [5]基于扶正祛邪理论的中医药治疗幽门螺杆菌感染相关疾病的证治规律研究[D]. 易惺钱. 江西中医药大学, 2021(01)
- [6]血脂水平与胃息肉的相关性研究[D]. 徐孝龙. 南昌大学, 2021(01)
- [7]致瘤微生物HPV和H.pylori调控mTOR信号通路介导恶性转化的机制[D]. 崔秀杰. 山东大学, 2021(10)
- [8]连朴饮加减方治疗克拉霉素耐药幽门螺杆菌相关性胃炎的研究[D]. 丁辛. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [9]幽门螺杆菌感染对慢性胃炎患者胃内菌群影响的初步研究[D]. 杜秋颖. 右江民族医学院, 2021(02)
- [10]幽门螺杆菌与Correa’s Cascade关系及ERM家族在其中的机制探究[D]. 宋聪华. 南昌大学, 2021(01)