一、NOV对大鼠神经干细胞增殖和分化的影响（论文文献综述）
曾宁溪[1]（2021）在《基于脉络丛叶酸转运-海马神经发生探讨补肾法抗LOD机制》文中研究指明目的:本研究旨在通过建立迟发性抑郁症（late-onset depression,LOD）大鼠模型,从脉络丛（choroidplexus,CP）叶酸转运-海马神经发生的角度探讨补肾治法方药二仙汤抗LOD的效应,揭示补肾治法方药抗LOD的神经药理学机制;同时丰富和创新中医“肾—脑髓体系”理论,并为今后补肾治法方药在防治老年性精神疾病中的运用提供科学依据。方法:1.抑郁症模型建立抑郁症模型采用慢性不可预计轻度应激（chronic unpredictable mild stress,CUMS）模型;LOD模型的建立采用自然衰老合并CUMS。CUMS模型大鼠接受连续6周的CUMS,应激源包括:禁食（12h）、禁水（12h）、夜晚持续光照（20:00-次日8:00,12 h）、足底电击（1mA,2 s/次,每次间隔30 s,共电击10次）、湿笼（10h）、白噪音（85 db,5 h）、频闪（300次/min,5h）、束缚（12 h）、热水游泳（水温45℃,强迫游泳5 min）、并笼（4只接受应激的大鼠放入同一鼠笼,10h）、禁食禁水（24h）等。每日随机施加1-2种应激源并结合孤养,3天内避免出现相同的应激源。自然衰老大鼠为20月龄雄性Wistar大鼠。2.观察二仙汤对LOD大鼠抑郁症状及认知功能的影响将雄性7-8周龄Wistar大鼠分为2小组:青年正常对照组（Control）、青年抑郁症组（CUMS）;雄性20月龄Wistar大鼠分为4小组:正常自然衰老组（AGED）、迟发性抑郁症组（LOD）、二仙汤治疗LOD组（EXD）、氟西汀联合叶酸治疗LOD组（FLX+FOL）;除Control组、AGED组,其余组大鼠均接受6周的CUMS;造模期间同时给予相应治疗干预,EXD组给予二仙汤（8g/kg/d）灌胃,FLX+FOL组给予氟西汀联合叶酸（氟西汀10mg/kg/d,叶酸1.8 mg/kg/d）灌胃,其余组予等量纯净水灌胃;造模结束后,通过行为学实验评估抑郁样行为和认知功能变化,其中糖水偏爱实验检测快感缺失、旷场实验检测自发活动能力、强迫游泳实验评估绝望情绪、T迷宫检测学习记忆能力。3.观察二仙汤抗LOD大鼠海马神经元损伤、神经发生障碍的效应Western-blot检测海马组织巢蛋白（Nestin）、双皮质素（doublecortin,DCX）、神经元核心抗原（neuronal nuclei antigen,NeuN）蛋白表达;免疫荧光检测海马齿状回（Dentate gyrus,DG）Ki-67/Nestin双阳性细胞数、5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-Bromo-2-deoxyUridine,BrdU）/DCX 双阳性细胞数。4.观察各组大鼠脑脊液（cerebrospinal fluid,CSF）对原代海马神经干细胞增殖分化的影响体外高浓度（corticosterone,CORT）模型模拟整体实验中抑郁症模型应激性高浓度皮质酮损伤;体外D-半乳糖（D-galactose,D-gal）老化模型模拟整体实验中有关衰老的改变;体外高浓度CORT合并D-gal模型模拟整体实验中LOD有关应激和衰老的改变。（1）观察CSF对神经干细胞增殖的影响（CCK8法）。细胞共分为四个大组,分别是正常原代海马神经干细胞大组（含A、B、C、D、E、F、G组,共7个亚组）、原代神经干细胞的高浓度CORT模型大组（含H、I组,共2个亚组）、原代神经干细胞的D-gal老化模型大组（含J、K组,共2个亚组）、原代神经干细胞的高浓度CORT合并D-gal模型大组（含L、M、N、O组,共4个亚组）,共计14个亚组。各亚组具体处理如下:A组:神经干细胞生长培养液作用72 h;B组:含10%Control组大鼠CSF的神经干细胞生长培养液作用72 h;C组:含10%CUMS组大鼠CSF的神经干细胞生长培养液干预72 h;D组:含10%AGED组大鼠CSF的神经干细胞生长培养液作用72 h;E组:含10%LOD组大鼠CSF的神经干细胞生长培养液作用72 h;F组:含10%EXD组大鼠CSF的神经干细胞生长培养液作用72 h;G组:含10%FLX+FOL组大鼠CSF的神经干细胞生长培养液作用72 h;H组:含120 μMCORT的神经干细胞生长培养液作用72h;I组:含10%CUMS组CSF+120 μM CORT的神经干细胞生长培养液培养作用72 h;J组:含40 mg/mL D-gal的神经干细胞生长培养液作用72 h;K组:用含10%AGED组大鼠CSF+40 mg/mL D-gal的神经干细胞生长培养液作用72 h;L组:用含120 μM CORT和40 mg/mL D-gal的神经干细胞生长培养液作用72 h;M组:含10%LOD组大鼠CSF+120 μM CORT+40 mg/mL D-gal的神经干细胞生长培养液作用 72 h;N 组:含 10%EXD 组大鼠 CSF+120μM CORT+40 mg/mL D-gal 的神经干细胞生长培养液作用72 h;O组:含10%FLX+FOL组大鼠CSF+120μM CORT+40 mg/mL D-gal的神经干细胞生长培养液干预72 h。（2）观察CSF对神经干细胞向神经元分化的影响（免疫荧光检测BrdU/DCX双阳性细胞比例）细胞共分为四个大组,分别是正常原代海马神经干细胞大组（含A、B、C、D、E、F、G组,共7个亚组）、原代神经干细胞的高浓度CORT模型大组（含H、I组,共2个亚组）、原代神经干细胞的D-gal老化模型大组（含J、K组,共2个亚组）、原代神经干细胞的高浓度CORT合并D-gal模型大组（含L、M、N、O组,共4个亚组）,共计14个亚组。各亚组具体处理如下:A组:神经干细胞分化培养液处理;B组:含10%正常大鼠CSF的神经干细胞分化培养液处理;C组:含10%CUMS组大鼠CSF的神经干细胞分化培养液处理;D组:含10%AGED组大鼠CSF的神经干细胞分化培养液干预;E组:含10%LOD组大鼠CSF的神经干细胞分化培养液处理;F组:含10%EXD组大鼠CSF的神经干细胞分化培养液处理;G组:含10%FLX+FOL组大鼠CSF的神经干细胞分化培养液干预;H组:含120 μM CORT的神经干细胞分化培养液处理;I组:含10%CUMS组CSF+120μM CORT的神经干细胞分化培养液培养处理;J组:含40 mg/mL D-gal的神经干细胞分化培养液处理;K组:用含10%AGED组大鼠CSF+40 mg/mL D-gal的神经干细胞分化培养液处理。L组:用含120 μM CORT和40 mg/mL D-gal的神经干细胞分化培养液处理;M组:含10%LOD组大鼠CSF+120 μM CORT+40 mg/mL D-gal的神经干细胞分化培养液处理;N组:含10%EXD组大鼠CSF+120μM CORT+40 mg/mL D-gal的神经干细胞分化培养液处理;O组:含10%FLX+FOL组大鼠CSF+120 μM CORT+40 mg/mL D-gal的神经干细胞分化培养液处理。5.观察二仙汤对LOD大鼠血浆、CSF、海马组织中5-甲基四氢叶酸（5-Methyltetrahydrofolate,5-MTHF）含量的影响ELISA法检测各组大鼠血浆、CSF、海马组织的5-MTHF含量;分析血浆中的5-MTHF含量、CSF中的5-MTHF含量、海马中的5-MTHF含量之间的相关性;分析CSF中5-MTHF含量与海马组织中Nestin、DCX、NeuN蛋白含量之间的相关性;分析海马中5-MTHF含量与海马组织中Nestin、DCX、NeuN蛋白含量之间的相关性。6.观察二仙汤对CP紧密连接及叶酸转运蛋白表达的影响（1）整体实验中,Western-blot、免疫荧光法检测CP组织闭锁小带蛋白1（zonula occluden-1,ZO-1）、叶酸 α 受体（folate receptor α,FRα）、还原型叶酸转运体（reduced folate carrier,RFC）、质子耦合叶酸转运体（proton-coupled folate transporter,PCFT）蛋白的表达。分析CSF中5-MTHF含量与CP组织中FRα、RFC、PCFT蛋白表达之间的相关性;分析CSF中5-MTHF含量与CP组织中ZO-1蛋白含量之间的相关性。（2）体外实验中,采用原代脉络丛上皮细胞高浓度CORT模型模拟抑郁症的脉络丛上皮细胞的CORT损伤;原代脉络丛上皮细胞D-gal模型模拟自然衰老大鼠的脉络丛上皮细胞相关改变;原代脉络丛上皮细胞高浓度CORT合并D-gal模型模拟LOD大鼠脉络丛上皮细胞的细胞状态。原代脉络丛上皮细胞分为7组:①对照组（Control）:用脉络丛上皮细胞生长培养液作用72 h;②高浓度CORT模型组（CORT）:用含120 μM CORT的脉络丛上皮细胞生长培养液作用72 h;③D-gal老化模型组（D-gal）:用含40 mg/mL D-gal的脉络丛上皮细胞生长培养液作用72 h;④高浓度CORT合并D-gal模型组（CORT+D-gal）:用含120μM CORT+40 mg/mL D-gal的脉络丛上皮细胞生长培养液作用72h;⑤二仙汤冻干粉低剂量组（EXDL）:用含120 μM CORT+40mg/mLD-gal+二仙汤冻干粉500 mg/mL的脉络丛上皮细胞生长培养液作用72 h;⑥二仙汤冻干粉高剂量组（EXDH）:用含 120μM CORT+40 mg/mL D-gal+二仙汤冻干粉 1000 mg/mL的脉络丛上皮细胞生长培养液作用72 h;⑦氟西汀+叶酸组（FLX+FOL）:用含120 μM CORT+40 mg/mL D-gal+氟西汀55 μM+叶酸40 μg/mL的脉络丛上皮细胞生长培养液作用72 h。Western-blot、免疫荧光检测 ZO-1、FRα、RFC、PCFT 蛋白表达,qPCR 检测 FRα、RFC、PCFT mRNA表达;检测各组脉络丛上皮细胞的跨上皮电阻。结果:1.二仙汤改善LOD大鼠抑郁症状及认知障碍青年抑郁症大鼠及LOD大鼠均出现快感缺失、自发活动减少、绝望情绪等抑郁症状,并伴随学习记忆障碍,且LOD大鼠学习记忆障碍更为显着,二仙汤的治疗可缓解LOD大鼠快感缺失、自发活动减少、绝望情绪等抑郁症状并减轻学习记忆障碍。2.二仙汤改善LOD大鼠海马神经元损伤及神经发生障碍青年抑郁症大鼠及LOD大鼠均出现海马Nestin、DCX、NeuN蛋白表达减少,DG区Ki-67/Nestin双阳性细胞、BrdU/DCX双阳性细胞减少,LOD大鼠更为显着;二仙汤的治疗可上调LOD大鼠海马Nestin、DCX、NeuN蛋白表达,增加LOD大鼠DG区Ki-67/Nestin双阳性细胞数、BrdU/DCX双阳性细胞数。3.各组大鼠CSF对原代海马神经干细胞增殖分化的影响（1）各组CSF对原代神经干细胞增殖的影响与A组比较,B、C、D、F、G组原代神经干细胞增殖率升高,E组增殖率下降;与B组比较,C、D组原代神经干细胞增殖率下降。与A组比较,H、J、L组原代神经干细胞增殖率减少;与H组相比,I组神经干细胞增殖率无明显变化;与J组比较,K组神经干细胞增殖率改变不明显;与L组相比,M组神经干细胞增殖率显着下降,N组与O组增殖率上升。（2）各组CSF对原代神经干细胞向神经元方向分化的影响与A组比较,B、D、F、G组BrdU/DCX双阳性细胞比增高,C组BrdU/DCX双阳性细胞比例无差异,E组BrdU/DCX双阳性细胞比例下降;与B组相比,C组BrdU/DCX双阳性细胞比例下降。与A组比较,H、J、L组BrdU/DCX双阳性细胞比例下降;与H组比较,I组BrdU/DCX双阳性细胞比例下降;与J组比较,K组BrdU/DCX双阳性细胞比例升高;与L组比较,M组BrdU/DCX双阳性细胞比例减少,N、O组BrdU/DCX双阳性细胞比例升高。4.二仙汤增加LOD大鼠CSF、海马中5-MTHF含量（1）各组大鼠血浆5-MTHF含量无差异,LOD大鼠出现CSF、海马5-MTHF含量减少,二仙汤的治疗逆转了 LOD大鼠的CSF、海马5-MTHF含量减少。（2）CSF中5-MTHF含量与海马组织中5-MTHF含量呈现相关性;CSF中的5-MTHF含量与海马组织Nestin、DCX、NeuN的蛋白表达均存在相关性;海马中的5-MTHF含量与海马组织Nestin、DCX、NeuN的蛋白表达均存在相关性。5.二仙汤改善CP叶酸转运、调控CP紧密连接（1）整体实验中,青年抑郁症大鼠、自然衰老大鼠CP组织叶酸转运蛋白FRα、紧密连接蛋白ZO-1表达减少,LOD大鼠CP组织叶酸转运蛋白FRα、RFC、PCFT蛋白及紧密连接蛋白ZO-1减少,二仙汤的治疗可上调LOD大鼠CP组织FRα、RFC、PCFT、ZO-1 蛋白。（2）高浓度CORT合并D-gal条件下原代脉络丛上皮细胞FRα、RFC、PCFT蛋白及其mRNA表达减少,ZO-1蛋白表达减少;二仙汤冻干粉的干预可上调高浓度CORT合并D-gal条件下脉络丛上皮细胞FRα、RFC、PCFT蛋白及其mRNA表达水平,以及上调ZO-1蛋白表达。（3）CSF中5-MTHF含量与CP组织中FRα、RFC、PCFT蛋白表达均呈现相关性;CSF中5-MTHF含量与CP组织中ZO-1蛋白表达呈现相关性。结论:1.LOD大鼠自主活动明显下降,出现严重的学习记忆障碍,具有中医所述肾阳不足,髓海不充的病机特点。补肾治法代表方二仙汤能明显改善LOD大鼠的行为异常和认知障碍。2.LOD大鼠CSF组分发生改变并导致海马神经元损伤和神经发生障碍。补肾治法代表方二仙汤可以通过改变LOD大鼠CSF的组分,减轻海马损伤和促进海马神经发生。3.LOD大鼠CP结构受损以及叶酸转运障碍使CSF中叶酸含量明显降低,并导致神经发生障碍和神经元损伤。补肾治法代表方二仙汤可以减轻LOD大鼠CP结构损伤、调节CP叶酸转运蛋白的表达,增加CSF中叶酸含量。4.CP分泌CSF和转运叶酸是中医肾精上通于脑,填补脑髓功能发挥的重要机制之一;而CSF成分的变化可能是中医肾-脑相通的介质之一。
马玲[2]（2021）在《神经干细胞源外泌体促神经元分化作用与机制的实验研究》文中指出目的:神经管畸形（Neural tube defects,NTDs）是中枢神经系统最常见的先天性缺陷。手术治疗仅能修复组织缺损,但是对于神经功能的修复效果不佳。而细胞治疗既能够修复组织缺损又能进行神经元重建。我们课题组前期实验在NTDs大鼠的胚胎中移植骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）,发现定植于缺损部位的BMSCs中有约20%分化为神经元。广泛认为,越高的神经元分化意味着神经损伤修复和功能恢复越好。为了获得更好的细胞治疗效果,我们探索提高BMSCs向神经方向分化的新方法。外泌体（exosomes）是由细胞分泌的双层包裹的小囊泡,含有其来源细胞的成分,因而具有其来源细胞的功能特征。神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）具有自我更新和分化为神经元及神经胶质细胞的能力,因此我们推测神经干细胞源外泌体可能携带某些特异性的功能分子,诱导BMSCs向神经方向分化,从而揭示脊髓微环境对于BMSCs向神经元分化导向作用的机制,同时利用神经干细胞源外泌体提高NTDs细胞治疗时移植的BMSCs向神经元分化的效率,进而改善治疗效果。研究方法:利用Lable free质谱技术,检测神经干细胞源外泌体、NSCs、BMSCs的蛋白质谱。通过GO分析,查找神经干细胞中具有促神经元分化功能的蛋白。利用Western Blot方法验证候选蛋白质在神经干细胞源外泌体、NSCs、BMSCs表达水平的差异。利用蛋白质组学筛选出的Netrin1（500ng/ml）诱导NSCs分化,并利用免疫荧光染色和Western Blot检测神经元标志物Map2、NF、β3-Tubulin的表达。在GEO数据库中检索到Netrin1相关的数据集GSE54107。利用生物信息学方法筛选表达上调并且具有促进神经元分化功能的分子。利用RNAi技术与Western Blot验证,在Netrin1作用下,NSCs中Netrin1下游功能分子蛋白表达水平的变化,并阻断该分子,观察Map2、NF、β3-Tubulin蛋白表达水平的改变。BMSCs培养基中分别添加神经干细胞源外泌体及500ng/ml Netrin1,检测Map2、NF、β3-Tubulin的表达。并且对全胚胎培养（whole embryo culture,WEC）的脊柱裂胎鼠羊膜腔内单纯注射BMSCs或联合注射BMSCs与神经干细胞源外泌体,检测定植BMSCs中β3-Tubulin阳性细胞百分率的差异。数据以均值±标准差表示,采用SPSS22.0软件对实验数据进行t检验和单因素方差分析,以p值表示统计差异,p<0.05认为差异具有统计学意义。结果:⒈Lable free质谱检测神经干细胞源外泌体、NSCs、BMSCs的蛋白质谱结果。⑴神经干细胞源外泌体、NSCs、BMSCs的蛋白质谱全GO分析的结果显示,神经干细胞源外泌体中细胞外基质成分比例高于NSCs。⑵神经干细胞源外泌体相对于NSCs上调蛋白的GO分析结果显示,外泌体富集了具有调节NSCs分化功能的蛋白。⑶神经干细胞源外泌体全GO注释结果显示有30个蛋白在GO注释中为阳性调节神经元分化（GO:0045666）。质谱检测结果显示在30个蛋白中Netrin1、Nedd4l、Ptprz1、Fn1在神经干细胞源外泌体中表达水平高于NSCs,Pafah1b1、Camk2d、Gsk3b、Prpf19、Netrin1、Rufy3、Camk2b、Ptprz1、Reelin在神经干细胞源外泌体中蛋白表达水平高于BMSCs。⑷Western Blot验证结果显示与其来源细胞NSCs相比,Netrin1、Nedd4l富集表达于神经干细胞源外泌体中（p=0.0007、p<0.0001）,并且表达水平高于BMSCs（p=0.0004、p<0.0001）。⒉Netrin1诱导NSCs向神经元分化的实验结果。⑴500ng/ml Netrin1培养的小鼠NSCs中β3-Tubulin的阳性率高于对照组的（p<0.0001）,并且Map2、NF、β3-Tubulin蛋白水平表达上调（p=0.0068、p=0.0112、p=0.002）。⑵对Netrin1诱导i PS的RNA测序数据集GEO54107进行GO分析,在神经嵴分化（GO:0014033）功能注释下,筛选到Phox2b、Hand2、Wnt10a。PPI分析结果显示Hand2与Phox2b存在相互作用。⑶500ng/ml Netrin1培养的小鼠神经干细胞中,Phox2b、Hand2蛋白表达水平升高（p=0.0013、p=0.0023）,并且利用RNAi下调Phox2b在给予500ng/ml Netrin1诱导NSCs分化,Map2、NF、β3-Tubulin蛋白水平明显低于NC+500ng/ml Netrin1组（p=0.0001、p=0.0003、p=0.0002）。⒊体外神经干细胞源外泌体、Netrin1诱导BMSCs向神经元分化的实验结果,以及体外羊膜腔联合移植BMSCs与神经干细胞源外泌体治疗NTD胎鼠的实验结果。⑴神经干细胞源外泌体诱导BMSCs向神经元分化明显增多,β3-Tubulin阳性细胞的百分比明显高于对照组（p=0.0138）。并且神经干细胞源外泌体组中,Map2、NF、β3-Tubulin的蛋白表达水平明显上调（p=0.0033、p=0.0009、p=0.028）。⑵500ng/ml Netrin1诱导BMSCs向神经元分化明显增多,β3-Tubulin阳性细胞的百分比明显高于对照组（p<0.0001）。500ng/ml Netrin1诱导BMSCs中神经元标志物Map2、NF、β3-Tubulin蛋白表达水平明显升高（p=0.0001、p=0.0064、p=0.0061）。⑶在全胚胎培养的大鼠神经管畸形模型中,神经干细胞源外泌体与BMSCs联合治疗组的BMSCs的神经元分化率明显高于单纯BMSCs组（p<0.0001）。结论:1.神经干细胞源外泌体中携带30个促神经元分化的蛋白质,并对其中Netrin1、Nedd4l存在富集作用。2.胞外基质Netrin1能够通过上调Hand2、Phox2b促进神经干细胞向神经元分化。3.神经干细胞外泌体及外泌体中富集的Netrin1均能诱导BMSCs向神经元分化,并且能够提高NTDs细胞移植治疗时BMSCs向神经元分化的效率。
肖丽[3]（2021）在《瞬目反射评估2型糖尿病患者中枢神经系统损害的临床研究及黄芪多糖、人参皂苷Rg1优化人脐带间充质干细胞向神经干细胞转化的实验研究》文中指出瞬目反射评估2型糖尿病患者中枢神经系统损害的临床研究背景和目的:糖尿病的并发症可涉及多个器官和系统,包括神经系统。以往的电生理研究主要集中在周围神经系统方面,对颅神经和中枢神经系统的研究较少。因此,糖尿病患者早期中枢神经系统损害更容易被忽视和误诊。瞬目反射能为颅神经和中枢神经系统提供客观评估。然而,在2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）患者中,体重指数、头晕与瞬目反射之间的关系尚未被探讨。此外,作为瞬目反射参数之一的R2时限,至今尚未被研究。本研究旨在探讨T2DM患者瞬目反射的特点及影响因素,以期能为T2DM患者中枢神经系统损害的早诊断、早治疗提供电生理依据;为研究T2DM患者中枢神经系统损害建立预测模型。方法:设计一项横断面观察研究,纳入健康志愿者和T2DM住院患者。通过两个独立样本的t检验、单因素方差分析、logistic回归分析及ROC曲线分析瞬目反射参数（包括R1潜伏期、同侧R2潜伏期、对侧R2潜伏期、同侧R2时限和对侧R2时限）与2型糖尿病患者的性别、年龄、体重指数、病程、糖化血红蛋白、远端对称性多神经病变（distal symmetrical polyneuropathy,DSPN）、头晕症状的关系。结果:1.瞬目反射的各项参数与性别、年龄、糖化血红蛋白无相关性。2.瞬目反射潜伏期（包括R1、同侧R2和对侧R2潜伏期）与体重指数呈负相关,与T2DM病程呈正相关。3.与不伴DSPN的患者相比,伴DSPN的T2DM患者的瞬目反射潜伏期（包括R1、同侧R2和对侧R2潜伏期）更长,R2时限（包括同侧和对侧R2时限）更短。4.与无头晕的患者相比,头晕患者瞬目反射的潜伏期（包括R1、同侧R2、对侧R2潜伏期）较长,R2时限（包括同侧R2、对侧R2时限）较短。5.R2时限也是瞬目反射异常的预测因素。R2潜伏期是T2DM患者头晕的最敏感因子和最佳预测因子。结论:伴有低体重指数、长病程、DSPN及头晕症状的T2DM患者更容易出现瞬目反射异常,提示这些患者的颅神经或中枢神经系统损伤更严重。黄芪多糖、人参皂苷Rg1优化人脐带间充质干细胞向神经干细胞转化的实验研究背景和目的:多项研究表明,糖尿病会引起中枢神经系统的退行性改变,从而导致认知功能下降等症状出现。另外,随着社会的发展,脑卒中、神经系统退行性变及外伤所致的神经系统疾病的发病人数逐年增加,而目前这些疾病的临床治疗效果并不理想。神经干细胞（Neural stem cell,NSCs）移植为这些疾病的治疗带来了新的希望。来自胚胎组织和流产胎儿大脑的人类神经干细胞曾被认为是治疗神经退行性疾病和其他中枢神经系统疾病最有希望的候选细胞。然而,免疫排斥、伦理和成本问题限制了这些异体神经干细胞的使用。已有研究表明人脐带间充质干细胞（Human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs）可转化为神经干细胞和神经样细胞且仍保持免疫调节和抗氧化活性。反式维甲酸、积雪草等诱导剂可促进hUCMSCs转化成神经干细胞或神经样细胞的比例。但这些药物在促进细胞转化的同时,会减少细胞增殖或促进细胞凋亡。本研究旨在探讨黄芪多糖（Astragalus polysaccharides,APS）、人参皂苷Rg1优化hUCMSCs向神经干细胞转化的实验研究。方法:1.hUCMSCs的分离、培养及鉴定:1)将沃顿氏胶从脐带分离,剪成1mm2左右的碎片,均匀地铺在175cm2无菌塑料培养瓶中培养;2)采用形态学观察、流式细胞术检测细胞相关分子标志物表达;3)体外诱导hUCMSCs成骨、成脂、成软骨分化检测其多向分化潜能。2.NSCs的产生、鉴定:1)将hUCMSCs加入到神经干细胞诱导培养基中常规培养;2)采用连续传代培养及次级成球实验检测诱导而来的神经球的自我更新能力;3)采用细胞免疫荧光染色检测这些神经球向神经元及神经胶质细胞的再分化能力;4)采用流式细胞术及细胞免疫荧光染色检测诱导后神经球的神经干细胞标志物Nestin及SOX2的表达;5)采用流式细胞术检测诱导后的NSCs间充质干细胞表面标志物CD90和人白细胞相关抗原D（HLA-DR）的表达情况。3.APS、人参皂苷Rg1的最佳剂量的确定:1)制备含有不同浓度APS及人参皂苷Rg1的间充质干细胞培养基。采用CCK-8法检测不同浓度APS及人参皂苷Rg1对hUCMSCs增殖的影响;2)制备含有不同浓度APS及人参皂苷Rg1的神经干细胞诱导培养基。采用CCK-8法检测不同浓度APS及人参皂苷Rg1对hUCMSCs向NSCs转化过程中细胞活力的影响。4.评估APS及人参皂苷Rg1对hUCMSCs向NSCs转化过程中细胞凋亡的影响。采用Annexin V-PI法分别检测阴性对照组、APS组及人参皂苷Rg1组的细胞凋亡情况。5.评估APS及人参皂苷Rg1对hUCMSCs向NSCs的转化效率的影响:采用流式细胞术及细胞免疫荧光染色分别对阴性对照组、APS组及人参皂苷Rg1组的CD90、HLA-DR、Nestin及SOX2蛋白进行定量。6.APS及人参皂苷Rg1提高hUCMSCs向NSCs的转化效率的相关机制初探:采用Q-PCR技术检测相关信号通路m RNA的表达水平变化。结果:1.采用组织块贴壁培养法可大量获得hUCMSCs。这些细胞呈均匀纺锤样漩涡状生长,并具有在塑料培养瓶内贴壁生长的能力。流式细胞术检测CD44、CD73、CD90、CD105的表达均大于95%,CD34、CD45、HLA-DR的表达均小于2%。体外诱导实验表明hUCMSCs可成功分化为骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞,具有多分化潜能。2.hUCMSCs来源的神经球具有自我更新能力及向神经元、神经胶质细胞再分化的潜能。这些神经球的神经干细胞标志物Nestin及SOX2表达呈阳性。3.APS及人参皂苷Rg1促进hUCMSCs增殖和向NSCs转化的最佳剂量分别为1.6mmol/L和10μmol/L。4.APS及人参皂苷Rg1能够有效抑制hUCMSCs向NSCs转化过程中细胞的凋亡。5.CD90蛋白的表达随诱导时间的延长而降低且APS组、Rg1组细胞CD90表达量的下降比阴性对照组更明显。6.经APS、人参皂苷Rg1诱导后的神经干细胞依然不表达HLA-DR。7.APS组及人参皂苷Rg1组的Nestin及SOX2蛋白的表达水平均高于阴性对照组。8.APS及人参皂苷Rg1可下调hUCMSCs向NSCs转化过程中Wnt/β-catenin和Notch信号通路相关基因GSK3β、β-catenin、Notch和Hes1的m RNA的表达。结论:1.APS、人参皂苷Rg1可以显着优化人脐带间充质干细胞向神经干细胞转化。2.APS及人参皂苷Rg1提高转化效率可能与其抑制Wnt/β-catenin和Notch信号通路有关。3.移植APS或人参皂苷Rg1参与诱导的NSCs有望为治疗糖尿病中枢神经系统损害、脑卒中、神经退行性变及创伤所致神经系统疾病带来更好的疗效。
宋旆文[4]（2021）在《骨髓间充质干细胞在脊髓损伤后炎症反应及神经再生中的作用及调控机制》文中研究说明目的:研究骨髓间充质干细胞（BMSC-CM）对神经分化和免疫炎症的调控作用及其对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的作用。方法:在体外细胞实验,将BMSC-CM和神经干细胞（NSCs）进行共同培养7天,随后采用细胞免疫荧光,检测共培养7天后神经元和星形胶质细胞比例。在动物实验通过建立脊髓孙损伤动物模型,注射BMSC-CM利用组织免疫荧光和Western-Blot检测其对损伤局部神经元和星形胶质细胞再生的影响。同时,利用ELISA、WB、He染色、BBB评分,分别检测BMSC-CM对损伤局部炎症因子表达、神经细胞凋亡、空洞大小及大鼠下肢功能的影响。结果:体外细胞实验发现,BMSC-CM的加入共培养7天后,明显提高神经元所占总细胞数的比例,同时降低星形胶质细胞所占比例。在脊髓损伤局部,BMSC-CM治疗也能够促进损伤空洞周围瘢痕减少,促进神经元再生和神经纤维向瘢痕内芽生。同时,还发现BMSC-CM能够通过抑制促炎因子表达,上调抗炎因子分泌,进而减少损伤局部细胞凋亡、空洞大小,提高下肢神经功能评分。结论:BMSCs在抑制脊髓损伤后过度炎症反应和有效促进内源性NSCs更多的向神经元方面两个方面,促进脊髓损伤后神经功能的恢复。目的:检测BMSC-CM对BMP/Smad 1/5/8信号通路的影响。方法:在NSCs中分别加入骨形态发生蛋白4（BMP4）和BMP+BMSC-CM共培养7天,细胞免疫荧光检测NSCs分化情况。WB检测BMSC-CM对p-Smad 1/5/8表达的影响;建立脊髓损伤动物模型,在不同时间利用WB检测BMSC-CM对脊髓损伤大鼠局部组织BMP4和p-Smad 1/5/8表达的影响。结果:在NSCsz中加入BMP4后,其向星形胶质细胞分化比例明显增高,但这一生物学效应在加入BMSC-CM后,受到明显抑制,GFAP阳性星形胶质细胞比例下降,同时Map-2阳性神经元比例增高。WB结果表明BMSC-CM能够明显抑制NSCs早期p-Smad 1/5/8的表达。在脊髓损伤动物局部组织,BMSC-CM处理的大鼠,其局部BMP4和p-Smad 1/5/8表达均低于对照组。结论:通过抑制BMP4/Smad 1/5/8信号通路,BMSCs能够促进神经干细胞向神经元分化,减少向星形胶质细胞分化。目的:验证肝细胞生长因子（HGF）在BMSCs诱导SCI大鼠神经恢复中的作用方法:利用HGF和BMP4与NSCs共培养,检测其p-Smad 1/5/8表达及对其分化的影响。采用westernblot、ELISA、免疫组化、苏木精-伊红染色等方法研究HGF对SCI大鼠神经细胞再生和炎症的影响。Westernblot检测了HGF/c-Met与BMP/smad1/5/8信号通路的相互作用及其可能的分子机制。利用c-Met抑制剂或和si RNA,通过阻断BMP/c Met信号通路和沉默BMSCs中HGF的表达,检测影响BMSC-CM对SCI大鼠神经细胞再生和炎症、BMP/Smad 1/5/8信号通路产生影响。结果:通过抑制BMP/Smad信号通路,HGF在体外能够促进NSCs更加有效的向神经元分化,在SCI大鼠,促进损伤局部瘢痕边缘神经干细胞向神经元分化和突起生长,并通过调节炎症过程减轻继发性损伤,其与BMSC-CM具有类似生物学效应。当功能性阻断BMSCs中的c-Met抗体或HGF敲除可显着逆转BMSC-CM介导的功能改善。结论:MSC对SCI大鼠恢复的生物学效应主要依赖于HGF的分泌。目的:探讨BMSC-CM对NSCs和脊髓损伤SCI大鼠smad6表达的影响及其在神经干细胞分化中的作用。方法:体外（NSCs）和体内（SCI大鼠）检测BMSC-CM和TGF-β对Smad6表达的调节作用。采用westernblot分析和免疫组化染色,观察TGF-β及阻滞剂体内外对神经元和星形胶质细胞再生的影响。采用BBB评分评价不同时间点脊髓损伤大鼠的神经功能情况。结果:BMSC-CM在体外可上调smad6的表达。TGF-βI型受体激酶抑制剂SB431542预处理可抑制BMSC-CM相关Smad6表达的上调。BMSC-CM能促进神经干细胞向神经元分化,Smad6基因敲除部分减弱了这种神经分化作用,导致共培养7天后,神经元表达比例的降低。在体内,损伤后期Smad6的表达在早期被BMSC-CM所下调,但在损伤7天后其表达在BMSC-CM加入后升高。更重要的是,加入TGF-βI型受体激酶抑制剂仅能够抑制晚期BMSC-CM在脊髓损伤大鼠局部对Smad6的上调作用。结论:BMSC-CM可通过分泌TGF-β上调smad6的表达。它促进神经干细胞向神经元分化,部分是通过上调Smad 6.
岳倩文[5]（2021）在《烙灸对脊髓损伤大鼠内源性神经干细胞相关因子影响》文中指出目的通过脊髓损伤模型研究烙灸对脊髓损伤大鼠运动及感觉功能,损伤局部微环境及内源性神经干细胞相关因子的影响。方法采用自制Allen’s打击器制备SCI模型。实验大鼠分为假手术组（A组）、单纯损伤组（B组）、西药地塞米松组（C组）、烙灸治疗组（D组）,每组10只分别在第7d、14d、28d、42d、56d采用BBB评分、Reuter评分法判断损伤后大鼠肢体功能恢复情况。各组剩余大鼠分别在第7d、14d、28d取损伤段脊髓组织,用于电镜观察脊髓损伤后超微结构,Western blot蛋白检测及实时荧光定量PCR检测。结果（1）BBB评分、Reuter评分表明D组大鼠烙灸后肢运动状态,肢体感觉优于B组、C组大鼠（P<0.05）,疗效明显。（2）电镜观察脊髓超微结构变化,结果显示B组、C组及D组在脊髓损伤后均出现神经元细胞出现肿胀,髓鞘板层崩解,轴索分离,但经过28天烙灸治疗后,D组神经元细胞出现周围出现大量突触小泡,髓鞘结构变得清晰,呈洋葱样排列,而C组治疗神经元细胞恢复状况差于D组。（3）Western blot检测结果显示,术后7天,A组APC蛋白,B组GFAP蛋白含量高于其他组;术后14天,B组APC蛋白表达量下降,C、D组APC蛋白表达量上升,各组Nestin蛋白均有所增加;术后28天,GFAP蛋白中C组与D组蛋白含量表达低,C组与D组差异有统计学意义（P<0.05）。Nestin蛋白表达中,D组蛋白表达高于B组,差异有统计学意义（P<0.05）。实时荧光定量PCR结果显示,D组APC（Nestin）蛋白浓度高于B组和C组（P<0.05）,经过28天治疗D组GFAP蛋白浓度低于C组（P<0.05）。结论烙灸能促进脊髓损伤大鼠后肢运动和感觉功能的恢复。在烙灸干预下可以激活内源性神经干细胞并促进其增殖分化,抑制星形胶质细胞过度增加,从而修复大鼠受损神经细胞功能。
张伊[6]（2021）在《孕中期七氟醚麻醉对子代大鼠海马神经干细胞分化的影响及机制研究》文中研究说明目的:随着手术技术的不断提高和麻醉学科的不断发展,孕期手术的开展日益增多,妊娠期麻醉的需求也不断增长。吸入性麻醉药作为宫内手术的首选麻醉方法,其神经毒性这一话题成为麻醉学科和社会关注的焦点。孕中期一直被临床上视为孕期手术的相对安全时期,绝大部分孕妇非产科手术均在孕中期进行,以保证部分胎儿疾病可以得到早期干预和治疗。但随着大量的动物实验表明常用的吸入性麻醉药物会影响未成熟大脑的发育,造成认知功能的损害,人们逐渐意识到,相对安全的手术期并不意味着是相对安全的麻醉期。孕中期作为神经系统发育的关键时期,神经系统正处于大量增殖、分化及迁移的神经发生过程中,此时外界的细微影响（如药物或环境）均可能会导致远期神经系统发育的异常。近年来已有多篇关于孕中期母体麻醉药暴露对子代神经干细胞产生影响的研究报道,但其机制尚未明确。课题组的前期研究中已表明,孕中期大鼠连续三日暴露于3%浓度的吸入性麻醉药七氟醚2小时（h）后,影响了子代的神经系统发育及远期学习记忆能力,但单次3%浓度七氟醚暴露对子代大脑发育影响甚微。孕中期大鼠暴露于3.5%七氟醚2h后,可引起子代大脑中神经干细胞的过度自噬,从而导致其过度凋亡和增殖抑制,而暴露于2%七氟醚2 h的子代大脑并未表现出神经干细胞凋亡与增殖的异常。这表明吸入性麻醉药七氟醚对子代神经系统的影响与吸入的浓度、时间或暴露次数有关。近年来越来越多的研究表明麻醉药物能导致神经干细胞的分化水平异常。细胞周期决定细胞命运,一旦设定的细胞进程被打破,就可能导致严重的后果。神经分化作为神经系统发育中至关重要的过程,过早或抑制神经分化均可导致远期的神经系统发育障碍。在神经系统发育过程中,有多个基因参与维持神经干细胞的干性,使神经干细胞按照设定进行分化。有文献报道ATN1是维持神经干细胞干性的一个关键基因。我们的预实验结果也表明多次七氟醚麻醉后可导致子代大鼠和原代海马神经干细胞内的ATN1表达水平下降。目前尚未有关于不同暴露次数的七氟醚对于神经干细胞分化的影响及其机制的相关研究,因此本研究旨在探究七氟醚是否通过调控ATN1表达水平影响神经干细胞的分化水平。MicroRNAs（miRNAs）是一类由内源基因编码,高度保守的,长度仅约为20-24个核苷酸的单链非编码RNA,在生物体内有着重要的调控作用。已有多篇文献报道miRNAs在神经系统发育过程中有着重要作用。我们通过生物学软件预测mi R-410-3p与ATN1有特异性靶向结合位点并通过实验证明了其靶向结合能力。实验结果表明,多次七氟醚麻醉后,原代海马神经干细胞内的mi R-410-3p的表达水平上升。本研究旨在探究mi R-410-3p在七氟醚导致神经干细胞分化异常过程中的作用。综上所述,本研究旨在明确大鼠在孕中期单次与多次七氟醚暴露后对子代大鼠海马神经干细胞分化的影响,并拟探究七氟醚通过调控mi R-410-3p和ATN1表达水平影响海马神经干细胞的分化作用。研究方法:1、实验动物选择Sprague Dawley（SD）大鼠,进行合笼后记录孕期时间,孕鼠于孕期（Gestational,G）14日接受3%七氟醚麻醉2 h一次或G13、G14、G15连续三日接受3%七氟醚麻醉2 h,麻醉结束后于24 h,72 h及子代出生后28天（Postnatal,P28）利用Western Blot和免疫荧光实验方法检测神经干细胞标记物Nestin、神经元标记物β-tubulin III及星形胶质细胞标记物GFAP以观察神经干细胞分化情况。2、原代神经干细胞取自G14-16的SD大鼠海马区并通过免疫荧光验证其干性及分化能力,培养并传代至2-4代进行单次4.1%七氟醚麻醉2 h或连续3日4.1%七氟醚麻醉2 h,麻醉结束后于24 h,72 h及28 d通过Western Blot和免疫荧光实验观察七氟醚对神经干细胞分化的影响。3、前期实验发现七氟醚处理后ATN1表达水平降低,导致神经干细胞提前分化。构建ATN1过表达慢病毒载体感染神经干细胞,空载病毒感染的神经干细胞为阴性对照组,进行多次七氟醚麻醉后于上述相同时间点通过RT-q PCR、Western Blot和免疫荧光实验检测ATN1表达水平及神经干细胞的分化情况。4、利用生物学软件对可能调控ATN1表达水平的mi RNA进行分析预测,筛选出ATN1可能为mi R-410-3p的潜在靶基因,并利用双荧光素酶报告确认mi R-410-3p与ATN1靶向结合。5、预实验结果表明七氟醚处理后海马神经干细胞内mi R-410-3p表达水平升高,构建mi R-410-3p敲减慢病毒载体感染神经干细胞,进行多次七氟醚麻醉后,通过RT-q PCR、Western Blot和免疫荧光实验检测mi R-410-3p和ATN1表达水平及神经干细胞的分化情况。结果:1、母体单次七氟醚麻醉后子代大鼠海马神经干细胞的Nestin、β-tubulin III和GFAP蛋白表达水平,β-tubulin III和GFAP阳性细胞数与对照组相比无统计学差异。多次七氟醚吸入导致子代大鼠海马神经干细胞在24 h和72 h时Nestin蛋白表达水平下降,β-tubulin III和GFAP蛋白表达水平升高,β-tubulin III和GFAP阳性细胞数增多;在生后28 d时β-tubulin III蛋白表达水平降低,GFAP蛋白表达水平升高,海马CA1区β-tubulin III阳性细胞数减少,GFAP阳性细胞数增多。2、单次七氟醚麻醉后原代海马神经干细胞的Nestin、β-tubulin III和GFAP蛋白表达水平,β-tubulin III和GFAP阳性细胞数与对照组相比无统计学差异。多次七氟醚麻醉导致原代海马神经干细胞在24 h和72 h时Nestin蛋白表达水平下降,β-tubulin III和GFAP蛋白表达水平升高,β-tubulin III和GFAP阳性细胞数增多;在28 d时β-tubulin III蛋白表达水平降低,GFAP蛋白表达水平升高,β-tubulin III阳性细胞数减少,GFAP阳性细胞数增多。3、多次七氟醚麻醉导致子代大鼠神经干细胞和原代海马神经干细胞的ATN1表达水平下降;ATN1过表达并进行七氟醚麻醉后,在24 h和72h,与多次七氟醚麻醉组相比,ATN1、Nestin表达水平明显升高,β-tubulin III和GFAP表达水平降低,β-tubulin III和GFAP阳性细胞数明显减少;在28 d,β-tubulin III表达水平升高,GFAP表达水平降低。4、ATN1可与mi R-410-3p靶向结合。5、多次七氟醚麻醉导致神经干细胞内mi R-410-3p表达水平上升;mi R-410-3p沉默并进行七氟醚麻醉后,在24 h和72 h,与多次七氟醚麻醉组相比,mi R-410-3p表达水平明显降低,ATN1、Nestin表达水平升高,β-tubulin III和GFAP表达水平降低,β-tubulin III和GFAP阳性细胞数明显减少;在28 d,β-tubulin III表达水平升高,GFAP表达水平降低。结论:1、多次七氟醚麻醉导致子代大鼠神经干细胞及原代海马神经干细胞过早分化为神经元和星形胶质细胞,并在远期导致神经元减少和星形胶质细胞增加;单次七氟醚麻醉对子代大鼠神经干细胞及原代海马神经干细胞的分化并无影响。2、多次七氟醚麻醉后海马神经干细胞内ATN1表达水平下降,ATN1过表达可减轻七氟醚对原代大鼠海马神经干细胞早期及远期分化水平的影响;单次七氟醚麻醉对神经干细胞内ATN1表达水平无影响。3、ATN1与mi R-410-3p靶向结合;多次七氟醚麻醉后海马神经干细胞内mi R-410-3p表达水平上升,mi R-410-3p沉默可减轻七氟醚对原代大鼠海马神经干细胞早期及远期分化水平的影响;单次七氟醚麻醉对神经干细胞内mi R-410-3p表达水平无影响。
邵亚丽[7]（2020）在《梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的效应及促神经新生作用研究》文中研究说明背景梓醇是中药地黄的主要有效成分之一,既往研究表明,梓醇在脑缺血急性期给药具有神经保护作用,能够改善脑缺血大鼠神经行为学功能,促进缺血区周围血管新生和成体神经干细胞增殖存活,但梓醇延迟给药对于脑缺血大鼠的效应以及对神经干细胞的分化作用暂未研究。基于治疗脑缺血疾病药物匮乏的现状,且目前唯一公认有效的静脉溶栓药物组织型纤溶酶原激活剂（tissue plasminogen activator,t PA）的治疗时间窗狭窄（3-4.5 h）,该时段内极大多数患者不能及时就医。梓醇作为缺血性脑损伤的潜在保护剂,如果在t PA治疗时间窗外能够保护缺血脑区及周围组织,研究其药效学作用及对新生神经干细胞的分化作用,具有重要的科学价值和临床意义。本课题受国家自然科学基金项目（81873034）资助。目的观察梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的神经行为学影响以及神经新生效应和神经干细胞分化作用研究。方法1.SD大鼠随机分为6组,分为假手术组,模型组,造模后6 h首次给药组（5 mg/kg和10 mg/kg）,造模后4 d首次给药组（5 mg/kg和10 mg/kg）,电凝法制备局灶性永久性脑缺血（permanent middle cerebral artery occlusion,p MCAO）模型,给药组腹腔注射梓醇,对照组注射同等剂量生理盐水,每日一次,连续7天。各组大鼠分别于给药后1,4,7,14,21,28天进行体重测量及Bederson评分,神经功能缺损评分（modified neurologic severity score,m NSS）,肌力测试评分（muscle strength）,对神经功能恢复进行评价。2.结合Brd U体内标记细胞增殖,梓醇给药7,14,21,28天后各组大鼠取材,免疫荧光双标Brd U/Nestin检测室管膜下区（subventricular zone,SVZ）神经干细胞增殖存活情况,Brd U/GFAP,Brd U/DCX和Brd U/Neu N荧光双标检测神经干细胞分化为星形胶质细胞及神经元情况;免疫印迹法（Western Blot,WB）检测各组损伤侧SVZ区Nestin/DCX以及损伤侧皮层GFAP和Neu N的蛋白表达。3.由于新生鼠SVZ数量少且难以分离,本研究选择原代培养24 h内新生鼠海马区神经干细胞,进行纯化鉴定,Brd U标记细胞增殖,cck-8检测不同浓度的梓醇对神经干细胞活力的影响,加入分化培养基诱导干细胞分化,免疫荧光MAP-2,GFAP,MBP检测细胞分化,WB检测分化表型相关蛋白的表达。结果1.成功制备局灶性脑缺血模型,梗死体积为9.62±2.43%。行为学实验结果表明,梓醇给药组不同程度促进脑缺血大鼠体重增长,降低脑缺血大鼠Bederson和神经功能缺损评分,提高肌力测试评分,6h,5mg/kg组肌力测评分在14天时有显着差异（P<0.05,vs model）,21天时各组神经功能基本恢复至假手术水平,各给药组间无显着差异（P>0.05,vs sham）。2.梓醇给药后不同时点促进局灶永久性脑缺血大鼠损伤侧SVZ区神经干细胞增殖存活,Brd U/Nestin荧光结果提示脑区成体神经干细胞存在的事实。脑缺血后7天及14天,星形胶质细胞数量显着增加（P<0.05,vs model）,新生神经干细胞与神经元数量与模型组相比显着增加（P<0.05,vs model）,14天时DCX表达增强,6 h,5 mg/kg剂量组与模型组相比有显着差异（P<0.05,vs model）,其余给药组与假手术相比有显着差异（P<0.05,vs sham）,21天时各给药组GFAP表达降低,Nestin,Neu N表达增强,与模型组相比有显着差异（P<0.05,vs model）,与行为学结果基本一致。3.海马神经干细胞培养7 d后可增殖为直径为200μm左右的神经球,神经球呈现Brd U/Nestin免疫双标阳性;cck-8筛选出促进神经干细胞生长的梓醇浓度为0.1,1,10,100μM;用不同浓度的梓醇诱导P3代神经干细胞分化7天,可见MAP-2阳性的神经元,GFAP阳性的星形胶质细胞及MBP阳性表达的少突胶质细胞;10μM梓醇促进NSCs向神经元方向分化,0.1μM促进向星型胶质细胞方向分化。结论1.梓醇延迟给药促进局灶性永久性脑缺血大鼠体重增长,改善神经行为学评分。2.梓醇延迟给药促进局灶性永久性脑缺血大鼠损伤侧SVZ区神经干细胞增殖,促进缺血区域附近神经元存活,减少星形胶质细胞增殖。3.原代培养的海马神经干细胞具有旺盛的自我增殖和多向分化潜能,梓醇对神经干细胞向神经元和胶质细胞分化的作用有剂量效应。
王艳秋[8]（2020）在《川芎嗪联合神经干细胞移植干预局灶性脑缺血大鼠的作用机制研究》文中研究指明研究目的:前期实验研究发现,脑缺血后可以一定程度的刺激脑内内源性神经发生,参与缺血后的自发性修复,但是内源性神经发生并不能产生足够数量的成熟神经元和神经胶质细胞,因此对神经干细胞（NSCs）移植的关注与研究逐渐增多。课题组前期研究表明川芎嗪（TMP）对大脑中动脉阻塞（MCAO）模型大鼠神经发生及NSCs向缺血损伤区定向迁移有明显促进作用。SDF-1/CXCR4是经典的促进干细胞迁移的调控通路,Nrf2作为正性调节因子能够促进SDF-1的受体CXCR4的转录来促进骨髓干细胞迁移。本研究通过观察TMP联合移植NSCs对MCAO模型大鼠的干预作用,并基于干细胞生物学行为调控探讨TMP联合移植NSCs对缺血性脑卒中的作用机制。研究方法:使用线栓法建立大鼠MCAO模型,缺血后90min后再灌注。造模成功的大鼠按照神经功能评分随机分层分为模型组（Model）、川芎嗪（TMP）组、神经干细胞（NSCs）移植组、TMP联合NSCs移植组。同时设立伪手术（Sham）组做为对照。TMP及TMP+NSCs移植组术后次日进行腹腔注射给药TMP 40mg/kg,1次/d;NSCs移植组及TMP+NSCs移植组术后3天向缺血侧纹状体移植NSCs 3*107个/只。术后3d及取材前3d连续腹腔注射50 mg/kg BrdU。进行神经功能评分（mNSS）、肌力测验、网格行走、旷场实验及强迫游泳实验来考察TMP对大鼠神经功能和行动能力的改善;免疫荧光法检测 BrdU+、BrdU+/DCX+、BrdU+/NeuN+、BrdU+/GFAP+细胞分布情况观察NSCs的增殖、迁移、分化情况;PKH26+染色检测移植的NSCs的存活及迁移情况。Western blot检测SDF-1、CXCR4的蛋白表达及信号通路Nrf2、KEAP1、HO-1、NQO1的蛋白表达,实时荧光定量PCR检测CXCR4、SDF-1、VEGF和NGF基因的mRNA水平,研究NSCs发生迁移的作用机制。研究结果:1.TMP联合NSCs移植对MCAO模型大鼠神经修复效果评价:与伪手术组相比,缺血后MCAO模型大鼠体重、肌力、旷场行动能力明显下降,神经行为学评分显着升高,缺血病变对侧前肢错步指数升高,游泳静止时间变长,证明我们成功复制MCAO模型。TMP、NSCs移植、TMP+NSCs移植治疗后的大鼠神经功能行为学评分降低,肌力恢复,行动能力提升,错步指数下降,游泳时间增加,尤其以TMP+NSC移植组的治疗效果最佳。2.TMP联合NSCs移植对MCAO模型大鼠外源性NSCs存活、迁移和分化的影响:通过免疫荧光检测法观察到PKH26阳性的细胞,提示NSCs成功注射到纹状体并存活;而且除移植位点外,在附近也可以观察到PKH26阳性的细胞,提示存活的NSCs发生一定范围的迁移,且TMP+NSCs移植组迁移细胞数量更多、迁移距离更远。同时我们还检测了 PKH26分别与NeuN、GFAP双标的细胞,并没有发现双标阳性的细胞,提示移植到脑内的NSCs在目前检测范围内,未发现分化为神经元和星型胶质细胞。3.TMP联合NSCs移植对内源性NSCs增殖、迁移、分化的影响:缺血后,与伪手术组比较模型组 BrdU+、BrdU+/DCX+、BrdU+/NeuN+、BrdU+/GFAP+细胞数有所升高。与模型组相比,TMP、NSCs移植单独治疗以及两者联合组的BrdU+、BrdU+/DCX+、BrdU+/NeuN+、BrdU+/GFAP+细胞数均明显升高,且以联合治疗组最明显。4.TMP和NSCs移植对Nrf2/HO-1/CXCR4通路的影响:TMP组、NSCs移植组和TMP+NSCs移植组的CXCR4蛋白的表达均显着升高,同时三个治疗组Nrf2、HO-1、NQO1的蛋白表达上调、KEAP1蛋白表达降低。与模型组相比,TMP组、NSCs移植组和TMP+NSCs移植组可以上调SDF-1、CXCR4、VEGF、NGF基因。研究结论:1.TMP、NSCs移植以及TMP联合NSCs移植均可改善MCAO模型大鼠的神经行为学变化,尤以TMP联合NSCs移植作用最佳;2.提高移植到MCAO模型脑内NSCs的存活、迁移和分化,为TMP联合NSCs移植治疗MCAO模型大鼠的作用途径之一;3.促进脑区神经营养因子分泌,改善脑内微环境,并促进内源性NSCs增殖、迁移和分化,为TMP与联合NSCs移植对MCAO模型大鼠发挥神经保护的另一重要途径;4.激活Nrf2/HO-1/CXCR4通路,可能是TMP联合NSCs移植促进内源神经发生以及外源移植性NSCs存活、迁移和分化的部分作用机制。
荆莉[9]（2020）在《脑疏宁对缺血性脑卒中神经再生作用及其机制的实验研究》文中提出目的:探讨中药复方脑疏宁对急性期缺血性脑卒中神经再生的影响,及其发挥神经再生作用可能存在的分子调节机制,以期丰富中药治病的基础理论知识,为缺血性脑卒中提供新的治疗方案。方法:通过文献研究法整理分析脑疏宁组方中“君”药益母草的植物生态学特性及其药理等方面的研究进展;以体外分离培养并经过鉴定的大鼠胎鼠神经干细胞（NSCs）作为研究对象,设置脑疏宁梯度浓度（21.4 mg/mL、2.14 mg/mL、214 μ g/mL、21.4 μ g/mL、2.14 μ g/mL、0）分别干预NSCs 24小时和48小时后,以WST-1细胞增殖及细胞毒性检测脑疏宁对NSCs的作用;以浓度为50 μ M的抑制剂U0126和LY294002分别损伤处理NSCs 6小时后,培养基中加入浓度为21.4μg/mL的脑疏宁继续培养24小时,通过WST-1细胞增殖及细胞毒性检测及Image J神经球计数分析脑疏宁对NSCs损伤模型的影响;利用浓度为50 μM的抑制剂U0126和LY294002分别制备MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路阻断的NSCs模型,并给予脑疏宁（21.4 μ g/mL）干预处理,Western Blot法检测细胞MAPK/ERK信号通路中p-ERK1/2和p-Raf-1 Ser259蛋白以及PI3K/Akt信号通路中p-Akt蛋白的表达水平。结果:整理出益母草中包括生物碱,二萜类,黄酮类等化合物共有157种;与对照组相比,在一定浓度范围内脑疏宁能促进NSCs增殖,而高浓度脑疏宁具有细胞毒性,抑制NSCs增殖,浓度为21.4 μ g/mL的脑疏宁处理NSCs 24小时可以明显促进NSCs增殖（p<0.05）;浓度为21.4 μ g/mL的脑疏宁能够明显改善抑制剂U0126和LY294002对NSCs造成的损伤（p<0.05）;Western Blot结果显示,与对照组相比,脑疏宁处理组中p-ERK1/2蛋白表达明显升高（p<0.05）,而p-Akt蛋白没有改变,在MAPK/ERK信号通路阻断的细胞模型中,脑疏宁促进p-Akt蛋白和在总蛋白Raf-1中p-Raf-1 Ser259蛋白的表达（p<0.05）,在PI3K/Akt信号通路阻断细胞模型中,脑疏宁促进p-ERK1/2蛋白的表达（p<0.05）,而在总蛋白Raf-1中p-Raf-1 Ser259蛋白的表达水平降低（p<0.05）。结论:脑疏宁适宜的浓度与时间处理能够促进NSCs增殖,这一结果可能是通过刺激MAPK/ERK信号通路中ERK1/2蛋白磷酸化实现的;脑疏宁作用于缺血性脑卒中神经再生可能存在的内在机制是:在缺血期,通过降低抑制Raf-1磷酸化Ser259位点的活性,同时促进ERK1/2蛋白的磷酸化来活化MAPK/ERK信号通路;在再灌注期,通过活化Akt和抑制Raf-1的磷酸化来减轻ERK1/2对PI3K/Akt信号通路中Akt的抑制。
刘星宇[10]（2020）在《RADA16-I及CDNF对脑缺血再灌注损伤中神经再生和神经保护的作用及机制研究》文中研究说明研究背景脑卒中是目前最为常见的心脑血管疾病之一。主要分为出血性脑卒中（Hemorrhagic stroke）和缺血性脑卒中（Ischemic stroke）。现有的治疗手段还存在一些局限性,如组织纤溶酶原激活剂仅用于急性期治疗,传统的中草药存在毒副作用。传统观念认为,神经细胞死亡会引起不可逆的脑损伤。但近年研究发现,脑损伤会刺激成年哺乳动物中枢神经系统的神经再生与修复,并持续数月时间,这使得在脑卒中的慢性期寻找有效的药物治疗显得尤为重要。如果选用可行的方法刺激内源性神经干细胞的神经再生,使其向缺血半影区迁移并分化,产生新的神经元代替凋亡细胞,可以达到神经修复的作用。神经组织工程的三要素:支架材料,神经营养因子,种子细胞,在再生医学领域起着重要的作用。水凝胶早在1993年被Zhang等首次提出,因其具有良好的组织相容性,可以模拟细胞三维生长环境,成为优良的支架材料。在1999年该研究团队报道了 RADA16-I,在适宜的条件下可以引发其自组装,形成三维立体网状结构,有利于细胞的黏附和生长。CDNF于2007年被Lindholm等人发现,其含有187个氨基酸,并具有两个独特的结构域。CDNF作为一种新型的神经营养因子,可以为神经细胞提供营养,并对神经元的生长起重要作用。大量文献报道了 CDNF对于帕金森疾病的有效治疗及良好的神经修复作用。神经干细胞作为种子细胞的一种,因为其具有迁移性、分化性、免疫原性、来源广泛等特点,成为研究中枢神经系统的重要细胞。在脑缺血再灌注损伤中,需要寻找有效方法刺激神经再生和提高神经保护。已有文献报道了 RADA16-I水凝胶对喉返神经（RLNs）再生有效。CDNF在PD模型中可以减少中脑多巴胺能神经元受损,另外CDNF可以通过减少脑缺血损伤神经元内质网应激来达到神经保护作用。这些结果提示RADA16-I和CDNF具有促进神经再生和神经保护的作用,但是在脑缺血再灌注损伤模型中,两者是否对神经再生和神经保护有作用尚未见报道。本课题将利用神经组织工程,通过脑立体定位仪在侧脑室（LV）显微注射支架材料RADA16-I和神经营养因子CDNF,探究两者对神经干细胞各种特性的影响,并运用神经生物学、分子生物学、细胞生物学及动物行为学等技术研究其神经再生和神经保护作用及机制。研究目的1、RADA16-I及CDNF在脑缺血再灌注损伤中对神经再生的作用。2、RADA16-I及CDNF对体外培养神经干细胞增殖分化的作用。3、RADA16-I及CDNF对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。4、CDNF在脑缺血再灌注损伤中对神经再生和神经保护的作用分子机制研究。研究方法1、建立大鼠脑缺血再灌注模型采用改良的线栓法制备右脑中动脉闭塞（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,缺血2 h后拔出栓线实现脑缺血再灌注。2、大鼠脑内定位注射RADA16-I及CDNF腹腔注射10%水合氯醛,待大鼠无翻正反射后,固定于脑立体定位仪上。调整耳棒及大鼠头部高低,使前囟点和人字点Z值之差不超过0.05。然后调整定位针至前囟点,将X、Y、Z数值归零,作为参考零点。将定位针移动至指定位置并标记,颅钻打孔。将无菌蒸馏水、10μg RADA16-I、6μg CDNF、10μg RADA16-I+6μg CDNF,分别注射到大鼠脑内侧脑室中。3、BrdU腹腔注射和免疫荧光组织化学染色大鼠建立脑缺血再灌注模型,缺血2 h/再灌注70 h后给药,并按大鼠体重50 mg/kg的剂量,连续7天腹腔注射浓度为10 mg/mL的5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）。给药后第11天或第25天,对大鼠进行心脏灌流取脑。取出的鼠脑放在4%PFA溶液中固定24 h后,用10%、20%、30%的蔗糖溶液脱水。最后进行冰冻切片将组织切成40 μm的薄片,并取特定位置脑片进行免疫荧光染色实验。抗体来源属性和使用浓度分别为:BrdU（Sheep,1:500）,nestin（Ms,1:500）,DCX（Rb,1:500）,NeuN（Ms,1:250）,GFAP（Rb,1:500）,Caspase-3（Rb,1:500）。4、TTC染色及缺血梗死体积计算将大鼠断头,用刀片将大脑切成2 mm的脑片,放入提前配制好的2%TTC（1×PBS作为溶剂）溶液中。并置于37℃烘箱中孵育30 min。用扫描仪扫描正反面并保存图片,用Photoshop分析缺血梗死体积。缺血梗死体积百分比=（白色梗死面积×厚度）/（全层面积×厚度）× 100%。5、组织蛋白提取和SDS聚丙烯凝胶电泳选取大鼠SVZ脑区及缺血半影区的组织,研磨并裂解组织以提取蛋白。通过免疫印迹的方法来检测通路中相关蛋白的表达情况。6、神经功能缺陷评分根据Longa和Bederon的五分制的方法,在脑缺血再灌注24 h后,对大鼠进行神经功能缺陷评分。无神经功能损伤,记为0分;手术对侧前肢不能完全伸展,记为1分;向手术对侧转圈,记为2分;向手术对侧倾倒,记为3分;丧失意识,不能自主行走,记为4分。后续实验选择1～2分的大鼠。7、原代神经干细胞培养取怀孕SD大鼠第13.5天的胚胎前脑组织,消化成单细胞,加入适量神经干细胞培养基种植于6 cm皿中,置于培养箱中培养。每3天进行一次换液,每5天进行一次传代。8、神经干细胞增殖及分化检测将3000个左右的细胞接种于24孔板每个孔中,分为四组,在实验第5天进行细胞球拍照,统计各组数量及直径。体外培养5天的神经球接种于24孔板中,分为四组并加入神经干细胞分化培养基进行诱导分化,培养第7天进行免疫荧光染色。抗体来源属性和使用浓度分别为:GFAP（Rb,1:300）,Tuj1（Ms,1:200）。实验结果1、RADA16-I及CDNF在脑缺血再灌注损伤中对神经再生的作用1.1在侧脑室注射RADA16-I及CDNF重组蛋白,可以促进SVZ脑区细胞的增殖建立大鼠脑缺血再灌注模型,随机分为四组,缺血2 h/再灌注70 h后,通过脑立体定位仪在侧脑室分别注射无菌蒸馏水、10 μg RADA16-I、6μg CDNF、10μg RADA16-I+6 μg CDNF。给药后第11天,对大鼠进行心脏灌流取脑。制作冰冻切片,选取SVZ脑区进行BrdU与nestin、BrdU与DCX免疫荧光组织化学双重染色。结果发现,RADA16-I,CDNF,RADA16-I+CDNF三组均比CON组显着增加新生神经干细胞及新生神经祖细胞的数量。1.2在侧脑室注射RADA16-I及CDNF重组蛋白,可以促进细胞向缺血半影区的迁移建立大鼠脑缺血再灌注模型,随机分为四组,缺血2 h/再灌注70 h后,通过脑立体定位仪在侧脑室分别注射无菌蒸馏水、10μg RADA16-I、6μg CDNF、10μg RADA16-I+6 μg CDNF。给药后第11天,对大鼠进行心脏灌流取脑。制作冰冻切片,选取缺血半影区进行BrdU与DCX共染。结果发现,RADA16-I,CDNF,RADA16-I+CDNF三组均比CON组明显促进细胞向缺血半影区的迁移。1.3在侧脑室注射RADA16-I,可以促进神经干细胞向神经元的分化建立大鼠脑缺血再灌注模型,随机分为四组,缺血2 h/再灌注70 h后,通过脑立体定位仪在侧脑室分别注射无菌蒸馏水、10 μg RADA16-I、6μg CDNF、10μg RADA16-I+6 μg CDNF。给药后第11天,对大鼠进行心脏灌流取脑。制作冰冻切片,选取缺血半影区进行BrdU与NeuN共染。结果发现,与CON组相比,注射RADA16-I可以显着增加神经元的数量。1.4在侧脑室注射RADA16-I及CDNF重组蛋白,可以促进神经干细胞向神经元的分化建立大鼠脑缺血再灌注模型,随机分为四组,缺血2h/再灌注70h后,通过脑立体定位仪在侧脑室分别注射无菌蒸馏水、10 μg RADA16-I、6μg CDNF、10μgRADA16-I+6μg CDNF。给药后第25天,对大鼠进行心脏灌流取脑。制作冰冻切片,选取缺血半影区进行BrdU与GFAP、BrdU与NeuN共染。结果发现,在缺血半影区,与CON组相比,RADA16-I,CDNF,RADA16-I+CDNF三组对星形胶质细胞的数量无显着影响,但三组均可以显着增加神经元的数量。2、RADA16-I及CDNF对体外培养神经干细胞增殖和分化的作用2.1 RADA16-I及CDNF重组蛋白可以促进体外培养的神经干细胞的增殖取怀孕SD大鼠第13.5天的胚胎前脑组织,消化成单细胞,24孔板每个孔接种3000个左右的细胞。加入神经干细胞培养基培养,第5天在倒置显微镜下对每个孔中的细胞球进行拍照。统计直径在50～200 nm之间的神经球数量及直径。结果发现,RADA16-I,CDNF,RADA16-I+CDNF三组中的细胞球数量及直径均比CON组明显增加。2.2 RADA16-I及CDNF重组蛋白可以促进体外培养的神经干细胞的分化取怀孕SD大鼠第13.5天的胚胎前脑组织,消化成单细胞,加入神经干细胞培养基培养5天后,将细胞球接种在24孔板中（24孔板提前加入飞片和水凝胶）。加入神经干细胞分化培养基进行诱导分化,培养第7天进行免疫荧光染色观察。结果发现,RADA16-I,CDNF,RADA16-I+CDNF三组中星形胶质细胞及神经元的比例显着高于对照组。3、RADA16-I及CDNF在脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用3.1 CDNF能够促进脑缺血再灌注损伤的神经功能修复建立大鼠脑缺血再灌注模型,缺血2h/再灌注70h后,通过脑立体定位仪在侧脑室分别注射无菌蒸馏水、10μg RADA16-I、6μg CDNF、10μg RADA16-I+6μg CDNF。在给药后第0、1、2、3天,根据Longa和Bederon的五分制的方法对大鼠进行神经功能缺陷评分。给药后1天发现,RADA16-I组和CON组相比无显着差异;CDNF、RADA 16-I+CDNF两组比CON组明显降低神经功能缺陷评分,且两组之间没有明显差异。3.2 CDNF能够减少脑缺血再灌注损伤的脑梗死体积建立大鼠脑缺血再灌注模型,缺血2 h/再灌注70 h后,通过脑立体定位仪在侧脑室分别注射无菌蒸馏水、10 μg RADA16-I、6 μg CDNF、10 μg RADA16-I+6μg CDNF。给药后第4天,将大鼠断头,进行TTC染色。用Photoshop分析梗死体积,梗死体积百分比=（白色梗死面积×厚度）/（全层面积×厚度）×100%。统计发现,RADA16-I组和CON组相比无显着差异;CDNF、RAD A16-I+CDNF两组比CON组明显降低梗死体积百分比,且两组之间没有明显差异。3.3 CDNF能够减少缺血半影区神经细胞的凋亡建立大鼠脑缺血再灌注模型,缺血2 h/再灌注70 h后,通过脑立立体定位仪在侧脑室分别注射无菌蒸馏水、10μg RADA16-I、6μg CDNF、10μg RADA16-I+6μg CDNF。给药后第11天,对大鼠进行心脏灌流取脑。制作冰冻切片,选取缺血半影区进行Caspase3染色。结果发现,RADA16-I组和CON组相比无显着差异;与CON组相比,CDNF,RADA16-I+CDNF两组均可以明显减少缺血半影区Caspase3阳性细胞的数量。4、CDNF在脑缺血损伤中神经再生和神经保护作用的潜在分子机制为了探讨CDNF参与脑缺血再灌注损伤神经再生和神经保护作用的分子机制,建立大鼠脑缺血再灌注模型,缺血2 h/再灌注70 h后,通过脑立体定位仪在侧脑室注射CDNF,给药后第1 1天取大鼠缺血侧SVZ和缺血半影区的组织并裂解提取蛋白。通过SDS聚丙烯凝胶电泳检测ERK及STAT3通路中的相关蛋白。统计发现,CDNF使SVZ区域的p-STAT3的表达水平明显降低。此外CDNF使缺血半影区的p-ERK水平明显升高,p-STAT3的表达水平明显降低。由此说明CDNF参与脑缺血再灌注损伤中的神经再生过程主要是通过STAT3信号通路实现的,而神经保护需要ERK及STAT3通路的参与。实验结论1、RADA16-I及CDNF能够促进脑缺血再灌注损伤中SVZ脑区的神经再生。2、RADA16-I及CDNF重组蛋白可以促进体外培养神经干细胞的增殖和分化。3、CDNF在脑缺血再灌注损伤中可以起到神经保护的作用。4、CDNF可能通过ERK及STAT3信号通路调控脑缺血后的神经再生和神经保护。创新点1、RADA16-I及CDNF具有促进脑缺血再灌注损伤中的神经再生作用。2、RADA16-I及CDNF具有促进体外培养神经干细胞的增殖分化作用。3、CDNF在脑缺血再灌注损伤中调控神经再生和神经保护作用的潜在分子机制。
二、NOV对大鼠神经干细胞增殖和分化的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、NOV对大鼠神经干细胞增殖和分化的影响（论文提纲范文）
（1）基于脉络丛叶酸转运-海马神经发生探讨补肾法抗LOD机制（论文提纲范文）
| 答辩委员会名单及评定意见 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 迟发性抑郁症的发病及病理机制 |
| 第二节 迟发性抑郁症中的认知障碍 |
| 第三节 迟发性抑郁症中的脉络丛损伤及叶酸转运障碍 |
| 第四节 迟发性抑郁症的中西医治疗 |
| 第二章 立论依据 |
| 第三章 LOD大鼠抑郁症状、认知障碍及二仙汤的干预作用 |
| 一、技术路线图 |
| 二、材料 |
| 三、方法 |
| 四、结果 |
| 五、讨论 |
| 第四章 LOD大鼠海马神经元损伤、神经发生障碍及二仙汤的干预作用 |
| 一、技术路线图 |
| 二、材料 |
| 三、方法 |
| 四、结果 |
| 五、讨论 |
| 第五章 LOD大鼠脑脊液组分对海马神经干细胞的影响及二仙汤的干预作用 |
| 一、技术流程图 |
| 二、材料 |
| 三、方法 |
| 四、结果 |
| 五、讨论 |
| 第六章 LOD大鼠血浆、脑脊液、海马组织中5-MTHF含量及二仙汤的干预作用 |
| 一、技术流程图 |
| 二、材料 |
| 三、方法 |
| 四、结果 |
| 五、讨论 |
| 第七章 LOD大鼠CP叶酸转运的变化及二仙汤的干预作用 |
| 一、技术路线图 |
| 二、材料 |
| 三、方法 |
| 四、结果 |
| 五、讨论 |
| 第八章 综合讨论 |
| 结语 |
| 创新点与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 主要英文缩略语(按首字母排序) |
| 附录二 CUMS造模流程 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（2）神经干细胞源外泌体促神经元分化作用与机制的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:利用lable free质谱筛选神经干细胞源外泌体中具有促神经元分化作用的蛋白质 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要试剂的配制 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 实验耗材 |
| 2.1.5 分析软件 |
| 2.1.6 主要实验动物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大鼠骨髓间充质干细胞原代提取与扩增 |
| 2.2.2 大鼠神经干细胞原代提取 |
| 2.2.3 大鼠神经干细胞的鉴定 |
| 2.2.4 神经干细胞源外泌体的提取 |
| 2.2.5 神经干细胞源外泌体的鉴定 |
| 2.2.6 Lable free质谱检测 |
| 2.2.7 Western Blot鉴定筛选的蛋白 |
| 2.2.8 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 BMSCs与NSCs原代细胞提取及NSCs鉴定 |
| 3.2 神经干性源外泌体鉴定 |
| 3.3 SDS-PAGE凝胶电泳条带差异 |
| 3.4 差异蛋白及定量分析 |
| 3.5 GO注释与GO富集分析 |
| 3.5.1 全GO注释分析 |
| 3.5.2 差异蛋白GO注释与GO富集分析 |
| 3.5.3 神经干细胞源外泌体中促神经元分化蛋白筛选 |
| 3.6 聚类分析 |
| 3.7 Western Blot验证差异蛋白 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:Netrin1上调Hand2/Phox2b促进神经干细胞向神经元分化 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要实验动物及实验细胞 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 神经干细胞的提取与培养 |
| 2.2.2 Netrin1作用神经干细胞 |
| 2.2.3 Netrin1下游靶蛋白筛选 |
| 2.2.4 验证Hand2/Phox2b在Netrin1 促神经元分化中的作用 |
| 2.2.5 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 Netrin1促进大鼠神经干细胞的神经元分化 |
| 3.2 Netrin1促进小鼠神经干细胞的神经元分化 |
| 3.3 Netrin1处理细胞差异分析 |
| 3.4 Netrin1处理组中转录上调的基因的GO注释 |
| 3.5 聚类分析 |
| 3.6 PPI蛋白互作分析 |
| 3.7 Netrin1 促神经元分化作用依赖于Hand2/Phox2b |
| 3.7.1 Netrin1促进神经干细胞中Hand2和Phox2b蛋白表达 |
| 3.7.2 RNAi阻断Phox2b表达,检测 500ng/ml Netrin1处理后神经元标志物的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分:神经干细胞源外泌体促进骨髓间充质干细胞向神经元分化 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要实验动物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大鼠BMSCs原代提取与扩增 |
| 2.2.2 大鼠神经干细胞原代提取与鉴定 |
| 2.2.3 神经干细胞源外泌体的提取 |
| 2.2.4 神经干细胞源外泌体体外处理BMSCs并检测神经元标志物表达 |
| 2.2.5 500ng/ml Netrin1体外处理BMSCs并检测神经元标志物及Hand2、Phox2b的表达 |
| 2.2.6 利用全胚胎培养进行羊膜腔内联合移植神经干细胞源外泌体与BMSCs并检测神经元标志物表达 |
| 2.2.7 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 神经干细胞源外泌体促进BMSCs向神经元分化 |
| 3.2 Netrin1通过上调Hand2/Phox2b促进BMSCs向神经元分化 |
| 3.3 神经干细胞源外泌体促进大鼠神经管畸形胚胎细胞治疗的BMSCs向神经元分化 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 外泌体的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）瞬目反射评估2型糖尿病患者中枢神经系统损害的临床研究及黄芪多糖、人参皂苷Rg1优化人脐带间充质干细胞向神经干细胞转化的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 2型糖尿病的中枢神经系统损害 |
| 1.2 瞬目反射 |
| 1.3 人脐带间充质干细胞转化为神经干细胞 |
| 1.4 黄芪多糖的研究概况 |
| 1.5 人参皂苷Rg1 的研究概况 |
| 1.6 课题的研究目的与意义 |
| 第2章 瞬目反射评估2 型糖尿病患者中枢神经系统损害的临床研究 |
| 2.1 研究对象与方法 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 临床基本资料分析 |
| 2.2.2 T2DM患者BR各参数的性别差异 |
| 2.2.3 瞬目反射各参数与2 型糖尿病患者的年龄、BMI、病程、Hb A1C之间的相关性分析 |
| 2.2.4 健康组、T2DM无 DSPN 组和T2DM伴 DSPN 组之间瞬目反射的差异分析 |
| 2.2.5 T2DM患者中有头晕症状的患者瞬目反射特点 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 结论与展望 |
| 第3章 黄芪多糖、人参皂苷Rg1 优化人脐带间充质干细胞向神经干细胞转化的实验研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 脐带标本 |
| 3.1.2 实验试剂及仪器 |
| 3.1.3 方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 hUCMSCs的分离、培养及鉴定 |
| 3.2.2 hUCMSCs来源的NSCs的产生及鉴定 |
| 3.2.3 不同浓度APS、人参皂苷Rg1对hUCMSCs生长的影响 |
| 3.2.4 不同浓度APS、人参皂苷Rg1对hUCMSCs向 NSCs转化过程中细胞存活的影响 |
| 3.2.5 APS、人参皂苷Rg1对hUCMSCs向 NSCs转化过程中细胞凋亡的影响 |
| 3.2.6 APS、人参皂苷Rg1对hUCMSCs来源的NSCs中 CD90 及HLA-DR表达的影响 |
| 3.2.7 APS、人参皂苷Rg1对hUCMSCs来源的NSCs中 Nestin蛋白表达的影响 |
| 3.2.8 APS、人参皂苷Rg1对hUCMSCs来源的NSCs中 SOX2 蛋白表达的影响 |
| 3.2.9 PCR结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 结论与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 中药促进神经干细胞增殖、分化的研究进展 |
| 参考文献 |
（4）骨髓间充质干细胞在脊髓损伤后炎症反应及神经再生中的作用及调控机制（论文提纲范文）
| 缩略词对照表 |
| 摘要1 |
| Abstract1 |
| 摘要2 |
| Abstract2 |
| 摘要3 |
| Abstract3 |
| 摘要4 |
| Abstract4 |
| 第一部分 BMSC-CM 促进脊髓损伤后神经修复的作用 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 BMSC-CM促进NSCs向神经元方向分化 |
| 3.2 BMSC-CM对脊髓损伤后神经细胞再生的影响 |
| 3.3 BMSC-CM对炎症相关因子表达的影响 |
| 3.4 BMSC-CM对损伤局部凋亡、空洞及大鼠下肢功能评分的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 第二部分 BMSCs通过抑制BMP/Smad1/5/8 信号通路调控NSCs分化 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 BMSC-CM抑制BMP4 促进NSCs胶质化作用 |
| 3.2 BMSC-CM通过抑制Smad1/5/8 磷酸化调控NSCs分化 |
| 3.3 BMSC-CM对脊髓损伤后BMP/Smad1/5/8 信号通路表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 第三部分 BMSC-CM通过分泌HGF调控炎症反应和NSCs分化 |
| 1 引言 |
| 2 材料和实验方法 |
| 2.1 实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 BMSCs分泌HGF |
| 3.2 HGF通过BMP/Smad1/5/8 调控NSCs分化 |
| 3.3 HGF通过免疫调控降低损伤局部细胞凋亡,缩小空洞大小 |
| 3.4 c-Met抑制剂阻断HGF及 BMSC-CM生物学效应 |
| 3.5 HGF沉默消除BMSC-CM的生物学效应 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 第四部分 BMSC-CM通过上调smad6 的表达阻止NSCs向星形胶质细胞过度分化 |
| 1 引言 |
| 2 材料和实验方法 |
| 2.1 试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 BMSC-CM影响神经干细胞Smad6 的表达 |
| 3.2 BMSC-CM通过分泌TGF-β调控Smad6 的表达 |
| 3.3 BMSC-CM部分通过上调Smad6 促进神经干细胞向神经元分化 |
| 3.4 Smad6 基因敲除减弱BMSC-CM对 BMP信号转导的抑制作用 |
| 3.5 骨髓间充质干细胞分泌的TGF-β在脊髓损伤后期上调Smad6 的表达 |
| 3.6 SB431542 不同时期注射度脊髓损伤大鼠组织形态及神经功能的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 脊髓损伤与修复的细胞生物学 |
| 参考文献 |
（5）烙灸对脊髓损伤大鼠内源性神经干细胞相关因子影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 主要仪器与设备 |
| 1.3 主要试剂 |
| 2.方法 |
| 2.1 动物模型制备 |
| 2.2 治疗方法 |
| 2.3 大鼠运动及感觉功能评分 |
| 2.4 组织取材 |
| 2.5 Western blot(WB) |
| 2.6 实时荧光定量PCR(Real time-PCR) |
| 2.7 TEM(透射电镜) |
| 2.8 统计学处理 |
| 结果 |
| 1.大鼠一般情况 |
| 2.BBB运动功能评分结果 |
| 3.Reuter感觉功能评分结果 |
| 4.电镜观察结果 |
| 5.Western blot结果 |
| 6.实时荧光定量PCR结果 |
| 讨论 |
| 1.医学界对脊髓损伤研究进展 |
| 2.烙灸的研究进展 |
| 3.烙灸对脊髓损伤大鼠结构和功能影响 |
| 3.1 烙灸对脊髓损伤大鼠肢体运动及感觉功能影响 |
| 3.2 烙灸对脊髓损伤大鼠结构的影响 |
| 4.烙灸对脊髓损伤大鼠内源性神经干细胞增殖分化影响 |
| 4.1 烙灸对脊髓损伤大鼠APC蛋白表达 |
| 4.2 烙灸对脊髓损伤大鼠GFAP蛋白表达 |
| 4.3 烙灸对脊髓损伤大鼠Nestin蛋白表达 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 神经干细胞在脊髓损伤修复机制中的实验研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 个人简历 |
（6）孕中期七氟醚麻醉对子代大鼠海马神经干细胞分化的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:单次或多次七氟醚麻醉鼠神经干细胞分化水平的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验动物模型 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 动物合笼 |
| 2.2.3 实验分组 |
| 2.2.4 麻醉处理 |
| 2.3 实验细胞模型 |
| 2.3.1 实验细胞 |
| 2.3.2 实验分组 |
| 2.3.3 细胞培养及麻醉处理 |
| 2.4 Western Blot蛋白分析 |
| 2.4.1 蛋白提取 |
| 2.4.2 BCA法测定蛋白浓度及蛋白变性 |
| 2.4.3 配胶及电泳 |
| 2.4.4 转模、封闭及一抗孵育 |
| 2.4.5 二抗孵育与显影 |
| 2.5 免疫荧光 |
| 2.5.1 组织固定、包埋及切片与细胞固定 |
| 2.5.2 免疫荧光 |
| 2.6 神经干细胞鉴定及分化鉴定方法 |
| 2.6.1 神经干细胞的鉴定方法 |
| 2.6.2 神经干细胞分化鉴定方法 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 原代大鼠海马神经干细胞及其分化能力的鉴定 |
| 3.2 孕中期七氟醚吸入对子代大鼠海马神经干细胞早期分化水平的影响 |
| 3.3 孕中期七氟醚吸入对子代大鼠海马神经干细胞远期分化水平的影响 |
| 3.4 七氟醚暴露对原代海马神经干细胞早期分化水平的影响 |
| 3.5 七氟醚暴露对原代海马神经干细胞远期分化水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 ATN1 调控七氟醚对大鼠海马神经干细胞分化影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验动物模型 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 动物合笼 |
| 2.2.3 实验分组 |
| 2.2.4 麻醉处理 |
| 2.3 实验细胞模型 |
| 2.3.1 实验细胞 |
| 2.3.2 实验分组 |
| 2.3.3 细胞培养及麻醉处理 |
| 2.4 Western Blot蛋白分析 |
| 2.4.1 蛋白提取 |
| 2.4.2 BCA法测定蛋白浓度及蛋白变性 |
| 2.4.3 配胶及电泳 |
| 2.4.4 转模、封闭及一抗孵育 |
| 2.4.5 二抗孵育与显影 |
| 2.5 免疫荧光 |
| 2.5.1 组织固定 |
| 2.5.2 免疫荧光 |
| 2.6 实时荧光定量PCR |
| 2.6.1 RNA提取及浓度测定 |
| 2.6.2 反转录反应 |
| 2.6.3 qPCR |
| 2.7 慢病毒载体构建和感染 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 七氟醚暴露后子代大鼠海马神经干细胞内ATN1 表达水平下降 |
| 3.2 七氟醚暴露后原代海马神经干细胞内ATN1 表达水平下降 |
| 3.3 ATN1 过表达慢病毒感染神经干细胞的构建与鉴定 |
| 3.4 ATN1 过表达减轻七氟醚对海马神经干细胞ATN1 表达水平的影响 |
| 3.5 ATN1 过表达减轻七氟醚对海马神经干细胞分化的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 miR-410-3p对七氟醚暴露后大鼠海马神经干细胞ATN1 表达水平及分化水平的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验细胞模型 |
| 2.2.1 实验细胞 |
| 2.2.2 实验分组 |
| 2.2.3 细胞培养及麻醉处理 |
| 2.3 Western Blot蛋白分析 |
| 2.3.1 蛋白提取 |
| 2.3.2 BCA法测定蛋白浓度及蛋白变性 |
| 2.3.3 配胶及电泳 |
| 2.3.4 转模、封闭及一抗孵育 |
| 2.3.5 二抗孵育与显影 |
| 2.4 免疫荧光 |
| 2.4.1 组织固定 |
| 2.4.2 免疫荧光 |
| 2.5 实时荧光定量PCR |
| 2.5.1 RNA提取及浓度测定 |
| 2.5.2 反转录反应 |
| 2.5.3 qPCR |
| 2.6 双荧光素酶报告基因分析实验 |
| 2.6.1 细胞转染 |
| 2.6.2 双荧光素酶检测 |
| 2.7 慢病毒载体构建和感染 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 miR-410-3p靶向结合ATN1 |
| 3.2 七氟醚暴露后原代海马神经干细胞内miR-410-3p表达水平上升 |
| 3.3 miR-410-3p慢病毒感染神经干细胞的构建与鉴定 |
| 3.4 miR-410-3p沉默减轻七氟醚对miR-410-3p表达水平的影响 |
| 3.5 miR-410-3p沉默减轻七氟醚对ATN1 表达水平的影响 |
| 3.6 miR-410-3p沉默减轻七氟醚对大鼠海马神经干细胞分化的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本论文创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 麻醉药对神经干细胞分化影响的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的效应及促神经新生作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第1章 梓醇延迟给药对局灶性脑缺血大鼠神经行为学影响 |
| 引言 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验主要试剂 |
| 1.1.2 实验主要仪器 |
| 1.1.3 主要试剂配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 实验动物 |
| 1.2.2 电凝法制备局灶性永久性脑缺血模型 |
| 1.2.3 药物干预 |
| 1.2.4 模型纳入标准 |
| 1.2.5 神经行为学评分 |
| 1.2.6 数据分析 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 电凝法制备局灶性脑缺血模型 |
| 1.3.2 脑缺血损伤模型大鼠神经功能缺失 |
| 1.3.3 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠体重的影响 |
| 1.3.4 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠Bederson评分的影响 |
| 1.3.5 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠肌力的影响 |
| 1.3.6 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠mNSS评分的影响 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第2章 梓醇延迟给药对局灶性脑缺血大鼠缺血侧脑区神经干细胞分化作用研究 |
| 引言 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验主要试剂与材料 |
| 2.1.2 实验主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 动物分组及药物干预 |
| 2.2.3 BrdU体内标记 |
| 2.2.4 脑组织取材 |
| 2.2.5 脑组织冰冻切片 |
| 2.2.6 免疫荧光染色 |
| 2.2.7 Western Blot检测相关蛋白表达 |
| 2.2.8 免疫荧光染色图像采集与量化分析 |
| 2.2.9 数据处理 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 梓醇对脑缺血大鼠SVZ区神经干细胞的影响 |
| 2.3.2 梓醇对脑缺血大鼠SVZ区未成熟神经元的影响 |
| 2.3.3 梓醇对脑缺血大鼠缺血周围区成熟神经元的影响 |
| 2.3.4 梓醇对脑缺血大鼠缺血周围区星形胶质细胞的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第3章 梓醇对离体神经干细胞分化作用研究 |
| 引言 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 主要实验试剂及材料 |
| 3.1.2 实验主要仪器 |
| 3.1.3 主要试剂配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 神经干细胞的分离培养 |
| 3.2.2 神经干细胞的传代培养 |
| 3.2.3 免疫荧光鉴定NSCs |
| 3.2.4 免疫荧光鉴定NSCs增殖 |
| 3.2.5 cck-8 检测NSCs细胞活力 |
| 3.2.6 免疫荧光检测细胞分化 |
| 3.2.7 WB检测细胞分化相关蛋白表达 |
| 3.2.8 数据分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 细胞形态观察 |
| 3.3.2 神经干细胞鉴定 |
| 3.3.3 神经干细胞增殖能力测定 |
| 3.3.4 神经干细胞分化能力测定 |
| 3.3.5 梓醇对神经干细胞细胞活力影响 |
| 3.3.6 梓醇对神经干细胞分化作用影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 全文总结 |
| 创新点及意义 |
| 思考与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 神经干细胞移植治疗中枢神经系统疾病的研究现状 |
| 参考文献 |
| 硕士学位期间科研工作汇报 |
| 致谢 |
| 附:中英文缩略名词对照表 |
（8）川芎嗪联合神经干细胞移植干预局灶性脑缺血大鼠的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词 |
| 第一部分 文献综述 川芎嗪对缺血性脑卒中神经保护作用的研究进展 |
| 1 抑制炎性反应 |
| 2 抑制细胞凋亡 |
| 2.1 Caspase-3途径 |
| 2.2 Bcl-2家族 |
| 3 维持血脑屏障完整性 |
| 4 抑制神经细胞兴奋性中毒 |
| 5 清除自由基降低氧化应激反应 |
| 6 促进神经结构恢复 |
| 6.1 增加VEGF表达 |
| 6.2 增加NGF表达 |
| 6.3 增加bFGF表达 |
| 6.4 增加BDNF表达 |
| 7 促进神经干细胞发挥作用 |
| 7.1 内源性神经干细胞 |
| 7.2 外源性神经干细胞 |
| 8 总结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 一 材料和方法 |
| 1 实验材料与试剂 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 MCAO大鼠模型制备 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 神经干细胞移植 |
| 2.4 分组及给药 |
| 3 体重及行为学检测 |
| 3.1 体重检测 |
| 3.2 行为学检测 |
| 4 实验动物取材及处理 |
| 4.1 新鲜组织取材 |
| 4.2 心脏灌流固定取材 |
| 4.3 动物组织切片及染色 |
| 4.4 Western blot法检测 |
| 4.5 实时荧光定量PCR法检测 |
| 5 图像分析 |
| 6 统计方法 |
| 二 结果与分析 |
| 1 对体重和神经功能影响 |
| 1.1 对体重的影响 |
| 1.2 对神经行为学的影响 |
| 2 对神经干细胞的影响 |
| 2.1 移植的NSCs在MCAO模型大鼠脑组织中的变化 |
| 2.2 对MCAO模型大鼠NSCs增殖的影响 |
| 2.3 对MCAO模型大鼠NSCs迁移的影响 |
| 2.4 对MCAO模型大鼠NSCs分化的影响 |
| 3 促进NSCs迁移的机制研究 |
| 3.1 Western Blot法检测Nrf2/HO-1/CXCR4通路的调控因子 |
| 3.2 实时荧光定量PCR法检测迁移调控因子及神经营养因子 |
| 三 讨论 |
| 1 TMP联合NSCs移植对MCAO模型大鼠的药效作用 |
| 2 外源性NSCs在MCAO模型大鼠中的作用 |
| 3 内源性NSCs在MCAO模型大鼠神经发生作用 |
| 4 NSCs迁移的机制探索 |
| 结语 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（9）脑疏宁对缺血性脑卒中神经再生作用及其机制的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 急性期缺血性脑卒中与神经再生 |
| 1.1.1 急性期缺血性脑卒中 |
| 1.1.2 缺血性脑卒中后神经功能的恢复与海马神经再生障碍 |
| 1.1.3 MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路与神经再生 |
| 1.1.4 缺血性脑卒中MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路存在“交互”作用 |
| 1.2 中药与神经再生 |
| 1.2.1 中药对MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的影响 |
| 1.2.2 复方脑疏宁的立方依据及相关研究 |
| 1.3 研究内容与创新点 |
| 1.3.1 研究内容 |
| 1.3.2 研究创新点与技术路线 |
| 1.4 研究意义 |
| 第二章 中药药材益母草相关研究 |
| 2.1 药用植物生理生态学 |
| 2.2 益母草 |
| 2.2.1 益母草的植物学特征及生态学分布 |
| 2.2.2 益母草主要药物有效成分及其应用 |
| 2.3 小结 |
| 第三章 大鼠神经干细胞体外分离培养及鉴定 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 大鼠神经干细胞体外分离提取及原代培养 |
| 3.2.2 大鼠神经干细胞传代培养 |
| 3.2.3 大鼠神经干细胞鉴定 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 神经干细胞的形态观察 |
| 3.3.2 神经干细胞的鉴定 |
| 第四章 脑疏宁促进神经干细胞增殖的研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 中药脑疏宁溶液制备 |
| 4.2.2 中药脑疏宁处理神经干细胞 |
| 4.2.3 WST-1检测神经干细胞增殖 |
| 4.2.4 统计学分析方法 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 脑疏宁不同浓度处理24 h对神经干细胞增殖的影响 |
| 4.3.2 脑疏宁不同浓度处理48 h对神经干细胞增殖的影响 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 脑疏宁对经U0126和LY294002损伤后神经干细胞的作用 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 U0126和LY294002抑制神经干细胞增殖预实验 |
| 5.2.2 脑疏宁对U0126和LY294002最适浓度处理后神经干细胞的增殖 |
| 5.2.3 统计学分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 U0126和LY294002抑制神经干细胞增殖适宜浓度 |
| 5.3.2 脑疏宁对U0126和LY294002最适浓度处理后神经干细胞活率的影响 |
| 5.3.3 Image J计数脑疏宁对U0126和LY294002最适浓度处理后的神经干细胞球 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 WB法探究脑疏宁促进神经再生的机制 |
| 6.1 实验材料 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 WB法实验步骤 |
| 6.2.2 统计学分析 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 WB结果显影 |
| 6.3.2 脑疏宁与信号通路抑制剂对神经干细胞相关蛋白表达影响 |
| 6.3.3 脑疏宁对神经干细胞信号通路阻断模型相关蛋白表达的影响 |
| 6.3.4 脑疏宁对神经干细胞信号通路阻断模型Raf-1和p-Raf-1Ser259蛋白表达的影响 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 项目支持 |
| 致谢 |
（10）RADA16-I及CDNF对脑缺血再灌注损伤中神经再生和神经保护的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文目录 |
| 原始记录 |
| 致谢 |
| 附件 |
四、NOV对大鼠神经干细胞增殖和分化的影响（论文参考文献）
- [1]基于脉络丛叶酸转运-海马神经发生探讨补肾法抗LOD机制[D]. 曾宁溪. 广州中医药大学, 2021(02)
- [2]神经干细胞源外泌体促神经元分化作用与机制的实验研究[D]. 马玲. 中国医科大学, 2021(02)
- [3]瞬目反射评估2型糖尿病患者中枢神经系统损害的临床研究及黄芪多糖、人参皂苷Rg1优化人脐带间充质干细胞向神经干细胞转化的实验研究[D]. 肖丽. 南昌大学, 2021(01)
- [4]骨髓间充质干细胞在脊髓损伤后炎症反应及神经再生中的作用及调控机制[D]. 宋旆文. 安徽医科大学, 2021(01)
- [5]烙灸对脊髓损伤大鼠内源性神经干细胞相关因子影响[D]. 岳倩文. 宁夏医科大学, 2021(02)
- [6]孕中期七氟醚麻醉对子代大鼠海马神经干细胞分化的影响及机制研究[D]. 张伊. 中国医科大学, 2021
- [7]梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的效应及促神经新生作用研究[D]. 邵亚丽. 西南大学, 2020(05)
- [8]川芎嗪联合神经干细胞移植干预局灶性脑缺血大鼠的作用机制研究[D]. 王艳秋. 北京中医药大学, 2020(04)
- [9]脑疏宁对缺血性脑卒中神经再生作用及其机制的实验研究[D]. 荆莉. 中央民族大学, 2020(01)
- [10]RADA16-I及CDNF对脑缺血再灌注损伤中神经再生和神经保护的作用及机制研究[D]. 刘星宇. 山东大学, 2020(02)